Western Blot之PAGE胶电泳和转膜VIP免费

生物通首页今日动态生物通商城人才市场核心刊物仪器龙虎榜特价专栏生物中国科学人新技术专栏技术讲座技术期刊会展中心生物通快讯表观论坛ÄK测序|miRNA|表观遗传|蛋白研究|细胞研究|免疫学|转染摘要：在转移膜上显色其实就像是画家在画布上作画一样，不光要有好的画笔和颜料，适合的画布也是相当之重要。WesternBlotting亦是如此，没有选择好合适的转移膜是无法做出漂亮的结果的。因此，选择适合的转移膜，要让转移“膜”高一尺，帮衬而不是阻碍到我们的实验。免费索取：仅需3398元，AmershamECL预制胶电泳礼包拿回家！WesternBlot之PAGE胶电泳和转膜[选购宝典]【字体：大中小】www.ebiotrade.com时间：2005年09月13日来源：生物通分享到：别出心裁特别好用的蛋白分子量标准•谁可小看“蛋白标准”（下）•谁可小看“蛋白标准”（中）•谁可小看“蛋白标准”（上）•WesternBlot仪器之选href="http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-8/2005825181619.htm"target=_blank>WesternBlot仪器之选•WesternBlotting前传：想成为高手吗？•WesternBlot为什么必须要用内参？•生物通WesternBlot技术专辑之PAGE胶电泳和转膜您所在的位置：首页>新技术专栏Page1of7WesternBlot之PAGE胶电泳和转膜[选购宝典]-PAGE胶电泳|Western-生物通2013-1-24http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-9/2005913154358.htmPAGE倒胶的仪器我们在前面WesternBlot仪器之选已经介绍过了，除了顺手的工具能防止漏胶，PAGE剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响，这个配胶的比例，在《分子克隆》上有详细的论述家都不难查到。容易忽视的问题主要在于过硫酸铵（AP）一定要新鲜——最好用小指管配AP（写日期）保度，超过2周的AP扔掉算了，或者已经反复打开使用多次的AP都别用，小气病发作的后果往往是得不偿失不好多半是这里疏忽（或者混合不匀），因为相对配胶的其他组分，AP算最活跃分子——如果还有诸如漏或者配比错误或者Buffer搞错，那绝对是你自己找骂，不值得同情。水要用去离子的纯水，MilliQ级更好Cambrex(原来的FMC)有商品化的丙烯酰胺母液，很贵，也很好——配出的胶对200KD以上的蛋白的分辨率PAGE胶，条带清晰漂亮，可惜一直没有搞清楚配方的奥秘；但是数十倍于丙烯酰胺粉剂的价格令人却步，接触丙烯酰胺粉尘严重过敏的人可以选择这个。更加豪华的选择是已经凝好的预制胶，各种配方各种比例大小多少任君选择，打开即用，当然更直接方便，更吸引人的是结果漂亮，分辨率高，特别是重复性好，是"razorsharp"啊！平时都能用这么豪华的东西心情当然超爽啊，实验紧凑又轻松，效率也更高啊！如能这么“好马配好鞍”，想必更容易出结果，也就更容易拿经费吧！什么时候我们的实验才能实现这种良啊！Invitrogen旗下的Norvex和Cambrex（原来的FMC）PAGEr都是首选预制胶。可是在“社会主义初级阶奢侈品平时流流口水就算了，偏偏最近Invitrogen公司推出了新的优惠活动，买3盒NuPAGE预制胶就送电电转移，面对这种诱惑，你难道就没有一点非份之想的冲动？上样电泳：上样前蛋白样品最好离心，上样量不宜过多，以免看结果时，每个条带都弯弯地“笑”你贪多哦。其他的操作，按照说明控制电流，不要过多重复使用电泳Buffer（别小气，重复使用会降低缓冲能力像基本不会出问题了。当预染的Marker告诉你，你要分辨的蛋白已经到达最佳分辨区——分离胶的2/3处泳结束了。电泳结果检查：如果要做WesternBlot，是否需要先检查电泳结果呢？能先看看结果如何再进行下一步转好。考马斯亮蓝使用简便快速，可以分辨1ug左右的条带，是最经济通用的蛋白PAGE胶电泳染色方法。银杂一些但分辨率高很多，可以分辨2-5ng蛋白。可是由于考马斯亮蓝染色或者银染经过固定不可逆结合，面的WesternBlot实验，很多人会选择省略掉这一步——同样的样品跑2块胶，一块染色一块转膜，一般明问题。如果想在转膜前看看电泳结果，你需要用SYPROTangerine——这种金色荧光蛋白染料灵敏度很测4ng-8ng蛋白，接近银染，但使用非常简单，最重要的是由于不用酸碱或者有机溶剂固定，不干扰蛋白别适合Western转膜前的染色，或者非变性胶的活性蛋白的检测（比如染...