RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤

RNA 的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤关键词: RNA 琼脂糖 电泳 2025—03—09 00:00 来源：互联网 点击次数：38148 一、实验目的掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和方法.二、实验原理RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行.非变性电泳使用 1。0%-—1。4％的凝胶，不同的 RNA 条带也能分开，但无法推断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总 RNA 样品完整性时，配制普通的 1％琼脂糖凝胶即可。 三、实验材料、器具及药品蘑菇的总 RNA 溶液。 电泳仪,电泳槽，电子天平,移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等. 琼脂糖，1XTAE 电泳缓冲液,0。5μg/ml 溴化乙锭（EB)10X 载样缓冲液。四、实验步骤（1)用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2)在超净工作台上，用移液器吸取总 RNA 样品 4μl 于封口膜上。在实验台上再加入 5μl 1×TAE 电泳缓冲液及 1μl 的 10X 载样缓冲液,混匀后，小心加入点样孔。（3）打开电源开关，调节电压至 100V，使 RNA 由负极向正极电泳，约30min 后将凝胶放入 EB 染液中染色 5min，用清水略微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。 RNA 的变性琼脂糖凝胶检测试剂:（1)MOPS 缓冲液（10＊):0。4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS） (Ph7.0),0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。(2）上样染料:50%甘油，1mmol/L EDTA ，0。4%溴酚蓝，0。4%二甲苯蓝。（3）甲醛。（4）去离子甲酰胺。v 电泳槽清洗:去污剂洗洁净（一般浸泡过夜）——水冲洗—-乙醇干燥——3%H2O2 灌满—-室温放置 10 分钟--0。1％DEPC 水冲洗。操作：（1） 将制胶用具用 70％乙醇冲冼一遍，晾干备用。(2） 配制琼脂糖凝胶.① 称取 0。5g 琼脂糖，置洁净的 100ml 锥形瓶中,加入 40ml 蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。② 待胶凉至 60-—70 ℃,依次向其中加入 9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和0.5ul 溴化乙锭,混合均匀。③ 灌制琼脂糖凝胶。（3) 样品准备:① 取 DEPC 处理过的 500ul 小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS 缓冲液 2ul，甲醛 3。5ul,甲酰胺(去离子）10ul，RNA 样品 4.5ul，混匀。② 将离心管置于 60℃水浴中保 10 分钟，再置冰上 2 分钟。③ 向管中加入 3ul 上样染料，混匀。(4）上样.（5）电泳：电泳槽内加入 1XMOPS 缓冲液，于 7。5V/ml 的电压下电泳。（6)电泳结束后，在紫外灯下检查结果.