醇溶蛋白的提取1、取一粒种子,横向切下尾部的 1/3,用剪好的称量纸包好砸碎成粉,倒入已称量好的1
5ml 离心管中,并称量面粉的质量
带胚的部分在鉴定后发芽繁殖
2、按 15μl/mg 的比例加提取液,用取直的曲别针混匀,室温(最好是 37℃)下,摇动 2h,然后 12000rpm 离心 10min,取上清液
3、分离胶:(大板 20×40cm):80ml 凝胶液+0
8ml 甲酸+110μl 0
6%的过氧化氢,玻璃棒充分混匀,迅速倒入两玻璃板之间(10~20 分钟便会凝固)
小板:需配 40ml 即可,操作同上
4、浓缩胶:大板(20×40cm):25ml 凝胶+40μl 0
6% H2O2,迅速混匀并灌胶插梳
5、上样:每孔 10μl 点样(10μl 提取液+10μl 上样稀释液涡旋混匀)6、电泳:150V 30min,350-400V 跑出指示剂后再持续 1-2 小时或者 150V 40min,500V 跑 4h
7、染色:过夜
8、漂洗:自来水漂洗,用毛笔抚去胶表面的杂质后拍照
提取液:70%(70ml 酒精 + 30ml ddH2O)上样稀释液:40g 蔗糖,0
5g 甲基绿(0
25g 甲基紫),定容至 100ml
或 60 ml 甘油, 0
25g 甲基紫,定容至 100ml
6% H2O2:30% H2O2 1ml + 49ml ddH2O凝胶液: dd H2O x ml Vc 0
5 g FeSO4 0
01 g Acr 50gBis 2
5g 定容至 500ml电极缓冲液:正极 0
2%甲酸 2 ml——1000 ml 负极 0
1%甲酸 1 ml——1000 ml染色液:R250 0
5g(甲醇溶)甲醇 360ml10%TCA(三氯乙酸) 240mlDdH2O 定容至 1000ml 2 倍原液