第十一章 革兰阳性需氧杆菌VIP免费

第十一章G+需氧杆菌第一节炭疽芽胞杆菌炭疽是人畜共患病，由于疫苗接种和卫生条件改善，发病率明显下降，但可作为生物武器。炭疽一年均可发生。人通过食入病菌污染的食物；也可因接触带芽胞的皮毛、尘土、干燥菌粉邮件和吸入气溶胶而感染。可引起皮肤炭疽，胃肠炭疽，肺炭疽，可并发败血症和脑膜炎。一、微生物特性1.本菌为致病性细菌中最大的G+杆菌。两端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于菌体中央，有毒菌株有荚膜。2.为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格,最适温度为30℃～35℃，形成灰色、扁平干燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，使明胶表面液化成漏斗状。有毒菌株在血琼脂平板上可产生荚膜，用接种针挑取时呈粘丝状。3.细菌性抗原(1)菌体多糖抗原耐热、耐腐败,经长时间煮沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应(Ascoli热沉淀反应)。抗原特异性不高,能与其他需氧性芽胞杆菌发生交叉反应,应用时应作综合分析。(2)荚膜多肽抗原在体内有抗吞噬作用,称为侵袭因子，有助于病菌在体内繁殖扩散和建立感染。荚膜肿胀试验对鉴定本菌有一定意义。(3)芽胞抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。4.炭疽毒素由保护性抗原、致死因子和水肿因子三种蛋白质形成的外毒素复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。5.抵抗力本菌芽胞的抵抗力很强，在干燥土壤或皮毛中常温下可存活数十年,传染性可持续数十年之久。芽胞对碘及氧化剂较敏感,1：2500碘液、0.5％过氧乙酸10min即杀死。1.取病灶深部标本或痰和血液；肠炭疽取粪便或呕吐物；置65℃水溶30min，将非芽胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离培养。2.直接镜检发现G+大杆菌、两端平截、竹节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨大，可作初步报告。3.分离培养一般接种血琼脂平板，35℃、18-24h后可观察到较大、灰白色、边缘不整齐和有轻微溶血的菌落。二、微生物检验(1)形态学特征：包括镜检形态和菌落形态（如上）。(2)生化试验：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖。有些菌株迟缓发酵甘油和水杨素，产酸不产气。能水解淀粉。不发酵鼠李糖、半乳糖等其他糖类。能还原硝酸盐为亚硝酸盐。VP试验不定。不产生吲哚和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素。在牛乳中生长2-4天牛乳凝固后缓慢融化。卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性。鉴定取用37℃、4-6h待检肉汤培养物，涂布于普通琼脂平板，将AP631炭疽噬菌体1滴，于平板中央划一直线,置37℃18h，出现噬菌斑或噬菌带者为阳性，每份标本应作2-3个同样的试验，同时滴种肉汤液作阴性对照。(3)噬菌体裂解试验将待检菌接种于含青霉素0.05—0.5U/ml的培养基经37℃培养6h后，炭疽杆菌可发生形态变化，显微镜下见大而均匀的圆球状菌体呈成串样排列，类炭疽杆菌无此现象。(4)串珠试验将待检菌分别接种于青霉素5、10、100U／ml的普通琼脂平板，37℃培养24h，炭疽芽胞杆菌一般在含5U／ml的青霉素平板上仍能生长，在含10、100U／ml青霉素的平板上受到抑制而不生长。(5)青霉素抑制试验将待检菌新鲜肉汤培养物0.1ml滴于预温的兔血琼脂平板上，用L形玻棒均匀涂布，干后用含青霉素1U／片纸片贴于平板，371—2h℃，低倍镜下观察，可见纸片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青霉素浓度低,菌体细胞壁受抑而成为串珠。平板继续37℃孵育8-12h,测量抑菌环直径。(6)串珠青霉素抑制联合试验（7）重碳酸盐生长毒力试验将待检菌接种于含O．5％NaHCO3和10％马血清的琼脂平板上，置10％CO2环境37℃24-48h，有毒株形成荚膜，菌落呈粘液型，无毒株不形成荚膜，呈粗糙型菌落。炭疽芽胞杆菌是惟一具有致病力，致病物质为炭疽毒素，故对该毒素的检测显得十分重要取纯培养接种于肉汤培养液37℃24h,吸取0.1m1接种小鼠皮下,小鼠于72—96h发病并死亡接种部位呈胶样水肿，肝脾肿大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾涂片染色镜检分离培养，可检出炭疽杆菌。(8)毒素动物试验(9)植物凝集试验炭疽杆菌菌体多糖是某些植物凝集素受体，用凝集素试验检测炭疽杆菌。常用的方法有荧光标记试验和酶联凝集素吸附试验。本试验可与其他类炭疽芽胞杆菌相鉴别。(五)药物敏感...