第六章免疫学检测方法VIP免费

免疫学检测方法免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附检测和放射免疫技术,该方面的研究取得了长足的发展。由于该方法操作简单，前处理简化，检测快速、准确、敏感，检验成本低，检测容量大，可同时进行大批量样品检测。因此．具有潜在的广泛应用价值。免疫学检测技术是近几年发展起来的新技术，主要包括放射免疫技术、免疫酶技术、免疫荧光技术和免疫电镜技术等，现已广泛地应用于各个领域中。10多年前，一些研究者开始尝试把放射免疫和免疫酶技术用于食品农药残留检测，并取得极大成功。其中应用最多的是固相放射免疫饱和分析技术和酶联免疫吸附检测技术。在这些检测技术中其核心反应都是抗原抗体反应。所谓抗原是指一切具有抗原性的物质：抗体(又称免疫球蛋白)，是由抗原刺激机体而产生的特异性球蛋白。作为抗原(完全抗原)需要包括两个方面的特性：免疫原性和反应原性。免疫原性是指能够刺激机体产生抗体或诱导机体形成免疫回答反应的特性。反应原性是指能够与其诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性。完全抗原是一些大分子物质(分子量大于l万)，如蛋白质等。如果一种抗原只有反应原性而没有免疫原性则称为不完全抗原(半抗原)，它通常是一些小分子物质(分子量小于1000)，必须与其它大分子物质结合后才具有免疫原性。各种农药属于这类物质，不具有免疫原性．因此农药残留的免疫学方法检测要较医学等领域中致病微生物等完全抗原的免疫学方法检测复杂得多。农药残留酶联免疫，首先要把农药与载体蛋白连接起来，形成农药一载体蛋白结合物免疫原，才可用来免疫动物制备抗体。因此能否合成稳定、具有良好免疫原性的农药一载体蛋白结合物是整个农药残留免疫学检测技术研究的关键。农药免疫学检测技术的原理农药免疫学检测应用最多的两种固相免疫技术是固相放射免疫技术和酶联免疫吸附检测技术。固相放射免疫技术是采用标记抗原与未知抗原竞争限定量的固相抗体结合位点，然后通过测定抗原一抗体结合物中放射性强度的改变，确定未知抗原的存在及含量。酶联免疫（ELISA）ELISA是通过在合适的载体上，酶标限定量抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的标记抗体结合位点，形成抗体复合物。在一定底物参与下，复合物上的酶催化底物，使其水解、氧化或还原成另一种带色物质。由于酶的降解底物与显色是成正比的，通过眼观或分光光度计测定，从而确定是否存在未知抗原或含量。但由于放射免疫技术涉及放射材料的使用和经常制备放射标记物，检测设备也比较昂贵，所以越来越多地被较为安全、简便的ELISA方法取代。在利用免疫技术进行农药定量检测时，需要制备标准曲线，之后根据制备好的标准曲线即可对农药残留进行定量。免疫原的合成及酶标抗原的制备由于农药属半抗原，不具有免疫原性，因此在制备抗体前首先要合成农药一载体蛋白结合物免疫酶原。由于各种农药分子结构不同．各研究者所采用的方法也不一样，但在绝大部分情况下由于农药分子不具备连接反应基团，农药分子首先要经过衍生，之后通过连接物与载体蛋白连接。常用的裁体蛋白有牛血清白蛋白、人血清白蛋白和卵清蛋白等。农药衍生和连接的化学反应条件不能导致半抗原分子结构发生明显改变，否则抗原性将发生变化。另外，制备好的半抗原结合物在免疫动物前，要测定结合物中半抗原数目．因为结合中半抗原分子数目太多或太少，诱发抗体的能力都很差。用于合成农药一载体蛋白结合物的方法，在不引起酶失活情况下通常都可用来连接酶与农药分子，制备酶标农药抗原。抗农药抗体的制备抗农药的多克隆抗体可用农药一载体蛋白结合物直接免疫兔子等动物．之后每间隔一个月加强免疫．一股6个月左右可获得满意效价的抗血清。如果结合物免疫原性较差，则需要甚至长达1年的免疫才能获得满意效价的抗血清。多克隆抗体虽然具有生产成本低、生产方法简便等特点，但由于其特性随动物种类及个体差异而有变化，而且生产数量也受限制，因此不利于生产大批量商品试剂盒。单克隆抗体可通过用毒素载体蛋白结合物免疫小白鼠等．之后建立杂交瘤细胞系来生产。单克隆抗体虽然生产成本...