反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸VIP专享VIP免费

第21卷第1期2006年3月天津科技大学学报Jour衄lofTianjinUniVersi够ofScience&Tech∞logyV01．21N0．1Mar．2006反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸高年发，吴迪，张健(天津市工业微生物重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津300222)摘要：提出一种利用反向高效液相色谱法(RP-HPLc)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸的方法。应用反相c，。色谱柱0DS-2HYPERSIL250mm×4．6mm5斗m，以0．05m01．L．1NH4H2P04(用H3P04调pH2．6)为流动相，发酵液经稀硫酸预处理后直接进样分离定量，每一样品的分析过程不超过5min，可及时了解丙酮酸发酵过程中丙酮酸的变化，适于发酵液中丙酮酸的检测。关键词：反向高效液相色谱法；丙酮酸发酵液；丙酮酸中图分类号：TQ921．7文献标识码：A文章编号：1672_6510{2006)01m021JD4Deterlni的tionofPymVateinPy川VateFe珊entationBmth协Reve玛ed-ph嬲eHigh—perfo珊anceLiqllidChromatog咫phy(RP-HPLC)GAONi锄-fa，WUDi，ZHANGJi锄(TianjinKeyLaboratoryofIndustrialMicmbiology，CollegeofBiotechnology，TianjinUniVersityofScience＆Technology，Tianjin300222，China)Abst髓ct：ARP-HPLCmethodforthedetenninationofpyruvateinpyruvatefe瑚entationbrothw鹊developed．0DS-2HY-PERSILC18columnwasusedandmobileph髂ewasO．05m彬LNH4H2P04(adjustedtopH2．6witllH3P04)．码e801u—tion0fs砌plespre—treated硒tht11esolutionofs幽ricacidwauldbed反emined，nea11alysispmcesswouldbe矗nishedinfiveminutes．Themethodwaspmvedarapide珏．ectivewaytodete邛【linethepyruvateinpymvatefe册emationbmth．融”恻心：reversed—ph船ehighpe艋nanceliquidchromat唧ph(RP—HPLC)；p)rnlvatefe珊entationbrotll；pyruvate丙酮酸是机体代谢的重要中间代谢产物，是多种氨基酸、维生素以及其他一些有用物质合成的重要前体，在化工、制药和农用化学品工业中有广泛的用途¨J。由于近年来丙酮酸所具有的独特的减肥效果，丙酮酸的世界需求量迅速增长，价格居高不下，引起生产和研究的热潮旧J。丙酮酸及其他有机酸，可采用气相色谱分离。但采用气相色谱法进行有机酸分析时，常因有机酸的沸点较高、不易气化而需要先对其衍生再进行测定旧J，方法繁琐；同时又因有机反应不易定量进行而直接影响测定结果的准确性。早期的有机酸液相色谱测定方法，大多是采用阳离子交换法分离，然后以示差检测器检测。其检测器影响因素多，灵敏度收稿日期：2005．05—13作者简介：高年发(1945一)，男，江苏吴江人，教授，博士生导师低，样品需要富集HJ，而且离子柱与反相c，。色谱柱相比，价格昂贵，适用范围窄。目前反相高效液相色谱(RP—HPLc)是应用最广泛的液相色谱法，本文进行了RP—HPLC法测定发酵液中丙酮酸含量的研究，并把用离子柱sCR-101H¨1与用反相C。8色谱柱ODsl2HY—PERSIL两种色谱柱的测定方法的测定参数作了比较。提出一种利用反向高效液相色谱(RP-HPLC)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸的方法，确定了最佳色谱分离条件，可对丙酮酸发酵液定性定量分析，从而指导菌种选育和发酵条件的研究，为以后进行这方面的研究提供条件。万方数据·22·1材料与方法1．1仪器与设备ssIPC2000型高压液相色谱仪(SsIⅢ型输液泵，500型紫外可见检测器，ANASTAR色谱工作站)；LD5—10型低速离心机(北京医用离心机厂)；sP-2102uV型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；循环水式多用真空泵sHBⅢ(河南省巩义市站街光亚仪器厂)；PHs．3c型精密pH计(上海精密科学仪器有限公司)；AS2120A．型超声波清洗器(天津奥特赛恩思仪器有限公司)；移液枪(日本制造)。1．2主要试剂超纯水；葡萄糖(色谱纯)；H，PO。(生化试剂)；NH。H：PO。(分析纯)，天津市凯通化学试剂有限公司；甲醇(色谱纯)，天津康科德科技有限公司；硫酸(分析纯)，天津兴华化学试剂厂；丙酮酸(生化试剂)，中国医药(集团)上海化学试剂公司；仅一酮戊二酸(色谱纯)，SigIlla公司。1．3实验方法1．3．1有机酸标准样品的选择分别准确称取10、20、40、60、80mg丙酮酸置于100mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容，配制成丙酮酸标样系列溶液。...