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IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体VIP免费

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附件1IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体本试剂盒系采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体,加辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物,用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为96人份/包装。试验材料:(1)抗人IgM抗体(μ链):用pH9.5的包被液包被酶标板(2)冻干阳性血清/冻干阴性血清1支,0.2ml/支,工作浓度为1:10;(3)冻干辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物1支,0.5ml/支,工作浓度为1:20;(4)冻干小牛血清1支,1ml/支;(5)浓缩洗液(10倍浓缩)1瓶,50ml;(标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液);(6)A/B显色液和终止液各1瓶。(冻干试剂先用相应量的去离子水溶解,然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用,余下的放-20℃保存)(7)终止液:4NH2SO4(8)酶标仪。检测步骤:(1)将待检血清用稀释液100倍稀释,加入已包被抗人μ链抗体的酶标板一孔中,100μl/孔,同时加入已1:10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔,100μl/孔,置37℃水浴孵育1小时。(2)弃去血清,用PBS-T漂洗5遍,甩干。(3)将冻干辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物1:10稀释后,加入反应板相应孔内,100μl/孔,37℃水浴孵育1小时。(4)弃去酶标抗体,用洗涤液洗涤6次,甩干。(5)加显色液:于各反应孔内加A/B液各一滴,37℃,避光3~5分钟。(6)加终止液(4NH2SO4)于每反应孔,一滴/孔。结果判断:(1)目测方法:阳性对照孔呈明显蓝色,阴性对照孔呈无色,对照成立;若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色(TMB),则标本为出血热IgM抗体阳性,反之阴性。(2)酶联免疫检测仪检测:于450nm(TMB)阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N≥2.1,对照成立;若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥2.1,则标本为流行性出血热IgM抗体阳性,反之阴性。(阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记,若大于0.05按实际数值计算)意义:阳性结果,表明患者新近汉坦病毒感染,用于出血热早期诊断。

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