湖南省肿瘤医院检验科ClinLab.HNZL标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程文件编号：HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601版本号：2修改号：0生效日期：2013-07-01发行部门：质量管理小组编制人：陈建国审核人：肖平批准人：吴白平页码：第1页共62页1.目的规范血液及骨髓标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。2.适用范围血液及骨髓。3.标本3.1标本类型血液及骨髓。3.2标本采集3.2.1采血时间抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。3.2.2采血频率对怀疑菌血症的成人患者，推荐同时在不同部位采集2~3套（每套包括一瓶需氧瓶，一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶）对感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采集；婴幼儿患者，推荐同时在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。3.2.3采血量以无菌方法从患者肘静脉或股动脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血10-20ml，儿童为3-5ml。血液抽出后，立即以无菌操作注入血培养瓶，充分混合后送检。3.2.4骨髓标本用骨髓穿刺针从髂骨采集1-2ml,立即以无菌操作注入血培养瓶，由于骨髓标本量少可选择小儿需氧瓶及厌氧瓶。3.3标本拒收标准3.3.1血培养瓶破裂或有明显污染。3.3.2培养瓶标识与化验申请单不符。3.3.3用过期的培养瓶采集标本，采血量不足等。3.3.4对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放冰箱。冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。4.试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、沙保罗平板相关生化试剂等。4.2BACT9050全自动血培养系统、ATBExpression鉴定及药敏分析仪。成人需氧血培养瓶，厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、TDR系统鉴定卡及药敏板。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养、生物安全柜等。4.4试剂的有效期和使用参照试剂说明书。5.细菌鉴定和药敏质控参见《微生物组室内质量的控制程序》。6.检验步骤接收标本后，立即用Lis系统签收对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记联系湖南省肿瘤医院检验科ClinLab.HNZL标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程文件编号：HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601版本号：2修改号：0生效日期：2013-07-01发行部门：质量管理小组编制人：陈建国审核人：肖平批准人：吴白平页码：第2页共62页电话等病人信息。6.1自动化培养6.1.1置全自动血培养仪中。当标本有菌生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医生报告，同时转种血琼脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5%CO2培养箱培养18~24h。若涂片为酵母样真菌时，转种到念珠菌培养基上。从琼脂平板上挑取菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性菌和革兰阴性菌分别选用相应卡片上机进行细菌鉴定和药敏试验或者做K-B法药敏试验（具体操作见《药物敏感性试验标准操作规程》）。6.1.2仪器培养为阴性，报阴性后卸下血培养瓶，可报阴性结果。6.2手工培养6.2.1将血培养瓶置35℃孵育箱，经18~20h孵育在血琼脂平板或巧克力平板上盲目转种一次。6.2.2盲目传种后，培养瓶继续孵育至第5日，每日观察一次有无菌生长，并摇匀继续培养，下列几种情况提示有细菌生长。见下表1。表1培养瓶中有细菌生长时的不同反应反应菌种浑浊并有凝块金黄色葡萄球菌均匀浑浊，发酵葡萄糖产气大多为革兰阴性菌微浑浊，有绿色变化肺炎链球菌表面有菌膜，培养液清晰，底层溶血枯草杆菌表面有菌膜，膜下呈绿色浑浊铜绿假单胞菌血细胞层上面出现颗粒状生长，有自上而下的溶血溶血性链球菌厌氧培养瓶有变化，而需氧培养瓶无细菌生长可能为厌氧菌根据肉眼观察，对有细菌生长迹象，取菌悬液涂片作革兰染色，同时分离培养，接种需氧血琼脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5%CO2培养箱培养18～24h。次日纯培养再进行鉴定及药敏试验。7.操作流程血液、骨髓置血培养仪瓶中湖南省肿瘤医院检验科ClinLab.HNZL标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程文件编号：HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601版本号：2修改号：0生效日期：2...
