胶质芽孢杆菌荚膜染色方法的比较与改进凌云,肖智杰,连宾(1.江苏省生物多样性与生物技术重点实验室,江苏南京210046)(2.南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046)[摘要]荚膜是细菌的重要附属物,细菌有无荚膜以及荚膜物质厚度和化学组成是其重要特征之一.染色和观察荚膜形态是微生物研究中的基本技能,但荚膜的低折光性与亲和染料能力差等特性,使其不易着色,制作一张好的荚膜染色玻片需要正确的染色方法和一定的熟练程度.胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)以其肥厚荚膜为显著特征,该菌的许多有益特性都与其产生肥厚荚膜有密切关系.本文以该菌为试验对象,尝试采用7种负染方法对荚膜进行染色.结果表明:7种染色方法中,墨汁染色法和刚果红盐酸染色法简便快速且效果较好;对刚果红盐酸染色法进行了改进,使染色效果更为理想,该方法值得推广.[关键词]胶质芽孢杆菌,荚膜,染色方法[中图分类号]Q936[文献标识码]A[文章编号]100124616(2007)0420084205ComparisonandImprovementofSevenStainingMethodsUsedfortheCapsuleofBacillusMucilaginosusLingYun,XiaoZhijie,LianBin(1.JiangsuKeyLaboratoryofBiologicalDiversityandBiologicalTechnology,Nanjing210046,China)(2.SchoolofLifeScience,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,China)Abstract:Thecapsuleisanimportantkindofbacterialattachment.Theexistence,thicknessandchemi2calconstituentsofthecapsuleareimportantcharactersofbacteria.Capsulestainingandobservingarebasicskillsinbacterialcertification.Itneedsproperstainingmethodsandproficiencytomakestainingslideofcapsulebetter,becausethecapsulehaslowrefractionandlowaffinitywithdyes.Bacillusmuci2laginosusischaracterizedbyitsabundantcapsule,andmostusefulperformancesofthebacteriarelatetoitscapsules.Westudiedsevenmethodsofnegativestainingofbacterialcapsuleandcomparedtheirad2vantagesandweaknesses.TheresultsshowedthattheinkstainingmethodandCongored/hydrochloricacidstainingmethodaresimpleandconvenientaswellasfastandeffective;theimprovedCongored/hy2drochloricacidstainingmethodmakesthestainingmoreperfect,andthismethodisworthyofpopulariza2tionintherelatedlab.Keywords:Bacillusmucilaginosus,capsule,stainingmethod收稿日期:2007203226.修回日期:2007205210.基金项目:中国科学院知识创新工程项目(KZCX3-SW-140)、南京师范大学高层次人才科研启动基金(184070H2B39)资助项目.作者简介:凌云(1982—),女,硕士研究生,主要从事环境微生物方面的学习与研究.E2mail:wutong10251@sina.com通讯联系人:连宾(1964—),教授,博士,主要从事地质微生物方面的教学与研究,E2mail:bin2368@vip.163.com0引言荚膜是由某些细菌在一定营养条件下形成,并分泌于细胞壁外具有一定厚度的稳定的粘液状物质.荚膜的大小往往超过菌体细胞本身,有时荚膜不仅围绕着一个细胞,且围绕着许多细胞而形成菌胶团.荚膜的主要化学成分是多糖类物质[1],在高C/N的培养基上,容易形成较肥厚的荚膜.对细菌而言,有无荚膜、荚膜物质的组成和厚度是其重要特征之一.正确的染色和观察荚膜是微生物研究中的常规技术.荚膜的折光性低,与染料的亲和性差,不易着色,但荚膜渗透性较好,染料可透过荚膜,使菌体着色而在菌体周围呈—48—第30卷第4期2007年12月南京师大学报(自然科学版)JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY(NaturalScienceEdition)Vol.30No.4Dec,2007©1994-2009ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net现一浅色或无色透明圈.实验室常见方法是用碳素墨水对产荚膜菌进行负染色(又称背景染色),从而把荚膜衬托出来,再用光学显微镜观察它的存在.由于荚膜的含水量高,具有粘稠性,容易变形,如果操作不当(如:热固定或涂片太剧烈)或染色方法不好往往得不到理想的染色效果.胶质芽胞杆菌(Bacillusmucilaginosus)又名硅酸盐细菌,在无氮培养基中可产生大荚膜,细胞大小为4～7μm×1～112μm,革兰氏染色阴性,荚膜厚,有时比菌体大10倍以上,有2～4层,...
