��中华传染病杂志�!∀年#月第�∃卷第%期聚合酶链反应检测沙眼衣原体的进展吕火祥’张素英∃许立‘综述刘建栋&审校近年研究表明,沙眼衣原体∋()∗+,−.&+/0+1)2,+/&3,1·/04除5引起眼结膜炎外,在性传播性疾病的传染方面起到越来越重要的作用。在发达国家非淋病奈瑟氏菌性尿道炎和脓性宫颈炎患者,6帕以上由沙眼衣原体引起。此外,沙眼衣原体还可引起肝周炎,不育、盆腔炎症,宫外孕等‘’一%7。对沙眼衣原体的检测有经典的细胞培养法,检测相应抗原的各种酶联免疫法,荧光免疫法,以及基因探针的核酸杂交法等「‘一�,。培养法虽然敏感特异,被认为是沙眼衣原体检测的肯定标准,但它受多种条件的影响,且工作强度大。其它几种特异抗原检测的方法,虽然特异性很高,但敏感性不甚满意∋�帕一#帕4。基因探针的核酸杂交法虽然敏感性和特异性都很高,但基因探针通常都以同位素为标记,放射性危害较大,且检测过程繁琐,难以推广。新近发展起来的聚合酶链反应∋8(94在沙眼衣原体检测上的应用,使沙眼衣原体的检测变得简便、快速、敏感、特异。现就检测沙眼衣原体的8(9,综述如下。一、沙眼衣原体主要外膜蛋白∋:;:84特异的基因扩增检测主要外膜蛋白∋:;:84分子量为∀<=+,在衣原体原体∋>?4和网状体∋9?4中都存在,占外膜总蛋白的�肠以上,沙眼衣原体的各个血清型都有:;:8的基因∋2,≅∗4,其∀个高变区Α3ΒΧΑ3Β分别编码:;:8∀个突出于膜外的结构域ΔΕΦΧΔ=,Α,使得:2:8具有复杂的抗原抗体系综。ΕΓ/&∗)等‘Η,首先用∃个邮%个核昔酸组成的寡核昔酸(5ΒΙ6产一ϑ((Κ(555ΚΛϑ5刃(5ϑ(55((5(一%,和(5ΦΙ6产一Λ555Λ(ϑ5ϑΛϑ(Λϑ(5(5(5(Λ5一%产作为引物,对:;:8基因进行8(9扩增。在对沙眼衣原体�6个血清型的扩增检测中,除了血清型Μ外,其它都得到了满意的:;:8基因片段扩增产物。ϑ0&ΝΝ+&,和5)&Ο2Ε等‘#,,用这种819对∃例临床样品沙眼衣原体的:;:8基因进行扩增,扩增阳性的为#例,培养为�例阳性,�例培养法阳性的8(9全部阳性。≅+/0&1&+等’!,以15,和15Π为引物扩增沙眼衣原体�6个血清型的:;:8基因片断,产生扩增产物为一个�∃Ο8的片段,有时在血清型?+,Θ,Ρ和ΣΦ型中可产生另一产物#Ο8,并以(5。Ι6尸一5((55ϑ(ΛΛϑ(5(5ϑ((5ϑ5ϑ一%,这一寡核昔酸为探针,对扩增产物经Π2Γ/)Κ0Ε印迹后杂交,沙眼衣原体每个血清型扩增产生的�∃Ο8都与(5,产生阳性杂交,而与#Ο8无杂交反应,来确定8(9扩增:;:≅基因的特异性,再通过Λ∗Γ∗或Θ8+∗∗,>(;9Ρ、Θ&ΕΝ∗三种限制性内切酶切割扩增的:;:8=ΤΛ产物,以检测沙眼衣原体的�6个血清型。这种由8(9和限制片段长度的多形态分析∋9Κ3/0&Κ/&2ΕΝ0+Υ,ΚΕ/∗ΚΕΥ/)≅2∗−,2印)&3,·9ςΣ≅4结合的方法,在沙眼衣原体的分型上与血清学法相关极好,为沙眼衣原体的分型增加了另一种更科学的方法。82∗Κ等‘’4�用此法对沙眼衣原体标准株编码:;:8的Α3∗Α区进行测序,表明每个血清型都有特异的核昔酸序列。在对�∃6例泌尿生殖道感染的沙眼衣原体检测中,揭示引起这些疾病的沙眼衣原体常见的血清型为�Ω浙江省人民医院杭州邮政编码%�“∃Ω浙江省桐乡市第二人民医院中华伶染病杂志�!!∀年%月第�∃卷第%期���>∋%#帕4、ς∋�Η帕4、=和ϑ∋各占�∀呱4型,同时发现,=型易感染男性,ϑ型易感染女性。Ξ+ΕΥ等〔川,即对#!例来自不同地区临床标本中分离出来的沙眼衣原体;,≅∗基因进行8(9,而后对扩增产物经ΛΝΓ∗或Λ∗Γ∗和:38Ρ酶切后行9ςΣ8分析。结果发现,沙眼衣原体的传播与地理环境有关,不同的环境有不同的;,8Ρ=ΤΛ的序列多形态,建立各地标准的;,8Ρ=ΤΛ序列的多形态库对研究沙眼衣原体的传播很有意义。二、质粒=ΤΛ的8(9检测沙眼衣原体含有质粒,且该质粒存在于整个沙眼衣原体独特的原体—网状体发育周期。沙眼衣原体�6个血清型的质粒=ΤΛ是紧密相关的,而与其它的衣原体质粒=ΤΛ有很大的差别,两者不能很好的杂交。=+Α&.等‘∗幻先用沙眼衣原体ΣΦ血清型ΣϑΔ∀%∀的质粒克隆于载体质粒8?9%ΦΦ形成一个Ρ;<Ο的杂交质粒8ΠΣ,∃6,用碱提取纯化8ΠΣ&Ψ。=ΤΛ,并用ΠΦ。和Π、。及ΠΦ。和ΠΦ3。两组引物扩增83Σ,...
