芒果畸形病的巢式PCR检测VIP免费

162芒果畸形病的巢式PCR检测广东农业科学2012年第22期贾静，蒲金基，吕延超，占魏，王芳。，谢艺贤(1．海南大学环境与植物保护学院，海南海1：3570228；2．中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，海南儋州571737)摘要：建立了检测芒果畸形病的有效方法。利用Fusariumproliferatum的钙调蛋白基因序列设计外侧引物PRO1／PR02和内侧引物01／02，采用引物PR01／PRO2可以从芒果畸形病病原菌基因组中扩增出527bp的特异性基因片段，采用引物01／02可获得477bp的基因片段。巢式PCR的检测灵敏度达5×10ng／IxL，是常规PCR的100倍。此法具有良好的特异性和检测灵敏度，为芒果畸形病的早期诊断和及时有效的防治提供技术方法和理论依据。关键词：芒果畸形病：巢式PCR：检测中图分类号：$667．7文献标识码：A文章编号：1004—874X(2012)22—0162—03Detectionofmangomalformationdiseasebynested-PCRJIAJing，PUJin-ji，LVYan-chao，ZHANWei，WANGFang，XIEYi—xian(1．EnvironmentandPlantProtectionCollege，HainanUniversity,Haikou570228，China；2．EnvironmentandPlantProtectionInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Danzhou571737，China)Abstract：Thestudywastoestablishaneffectivedetectiontechniqueformangomalformationdisease．TheouterpairofprimersPRO1／PRO2andtheinnerpairofprimersOl／O2weredesigned，accordingtothecalmodulingenesequencesofFusariumproliferatum．Theresultsshowedthata527一bpspecificgenefragmentwasobtainedbyPRO1／PRO2．and477-bpwasamplifiedbyO1／O2．Thesensitivityofnested-PCRwasashighastothe5x10ng／~L．whichwas100timeshigherthanthesensitivityofroutinePCR．Nested-PCRWaSahighspecificityandsensitivitytothedisease，thetechniqueandtheorywouldbeprovidedforearlydiagnosisandpreventivetreal【ment．Keywords：mangomalformation；nested—PCR；detection芒果畸形病(mangomalformationdisease)是世界范围的芒果重要病害。1891年印度首次发现芒果畸形病[1]，目前该病害在世界各大芒果产区均有发生。而在我国，该病主要发生在云南元谋、元江、华坪和四川攀枝花，并确定发生在我国的芒果病原菌的FusariumproliferatumfMatsushima)Nirenbergt21。根据受害部位不同，芒果畸形病分为营养器官畸形和花序畸形两种症状[3]。营养器官畸形多发于幼苗，且成龄树也常见，会导致腋芽或顶芽大量丛生呈束状生长。受感染的花序整个或部分畸形膨大甚至收稿日期：2012—10—18基金项目：国家公益性行业(农业)科研专项(201203092—2)作者简介：贾静(1987-)，女，在读硕士生，E—mai1：jingl2l31O23@126．corn通讯作者：谢艺贤(1963-)，男，研究员，E—mail：yixian81@126．COB呈现盘状，花数明显增多，花轴变短、变粗，小花簇拥在一起，最后焦枯死亡，且不育花数目增加，雄蕊发育能力变差。畸形的花序几乎不能坐果，即使结果，果实也不能正常发育而败育。某些严重地区因芒果畸形病所致的经济损失达80％～1o0％。芒果畸形病从接种到发病表现症状通常需要长达半年的时间，且这段时间接种植株表观似正常植株，一旦发病将影响植株的结果能力。而嫁接在该病害传播上起着重要的作用。若带菌接穗引进到新果园中，芒果畸形病则在果园中传播蔓延，会给芒果产量带来无法预计的经济损失。如广西地区曾从攀枝花引进接穗而将芒果畸形病引入嗍．由于发现及时并采取了严格处理措施而将其铲除。避免了该病在本地区流行危害。鉴于此，建立准确的早期检测方法具有重要的理论意义和应用价值。本研究根据Fusariumproliferatum钙调蛋白基因序列，设计巢式j业jjjk，jj·业j业，蝴}j业jj业—9r业j—搴·k-，9}业业—jjjj坐j业·矗}j—‘夸j所占比例高达87．41％，仅12．59％的EST—SSR重复次数在10以上。依照SchlOtterer的观点，在本研究所发掘的EST—SSR中，仅少部分具有多态性潜能。而Xu等[51认为，等位基因重复序列的长度存在1个阈值．长度小于该阈值的SSR倾向扩张，反之SSR倾向收缩，大多数真核生物的阈值为20bp。在15665条黄瓜EST—SSR中，82．64...