视网膜定向铺片方法马科,徐亮(北京市眼科研究所,北京100005)摘要:目的:介绍一种大鼠视网膜定向铺片方法。方法:对不固定、固定1～12小时及固定24小时以上SD大鼠眼球采用碳素标记视网膜定向铺片,剪成上、下、鼻、颞四个区域。结果:不固定组视网膜容易撕裂,固定24小时以上组视网膜周边上卷,固定1～12小时组视网膜分离容易,铺片后视网膜平整并很好辨别各方向。结论:该方法简单实用,能很好地确定铺片后视网膜的方向,对于视网膜节细胞的定量分析等研究有重要意义。关键词:视网膜,铺片;动物,实验中图分类号:R774文献标识码:A文章编号:100424469(2002)0420238202Methodfordirectionfindingflatteningofratretinaontheslide/MAKe⋯∥OphthalmolCHN.22002,11(4).2238～239(BeijingInstituteofOphthalmology,Beijing100005)Abstract:Objective:Tointroduceamethodofdirectionfindingflatteningofratretinaontheslide.Method:Eyesof12rats,afterlabeledwithinkontheupperconjunctiva,weredevidedinto3groups,andtheenucleatedeyeballsingroupⅠwerenotfixedwithanyfixationfluid,whileingroupⅡ,theeyeballswerefixedin4%polymerformalin0.1MPBS1～12hrs.,andingroupⅢ,thefixationtimewasover24hrs.Accordingtotheconjunctivalinkmark,theratretinaewerecutwithscissorsintoupper,lower,nasalandtempo2ralpieces,andflattenedontheslide.Results:Of8eyesingroupⅠ,6eyesweretorneasily,whilethosefixedforover24hrs.,theedgesofretinaerolledup.Theretinaefixedfor1～12hrs,separatedfromchoroideasily,andafterflattenedontheslide,theywereflatanddirectioncanbeidentified.Conclusion:Thismethodissimpleanduseful,bywhichthedirectionofratretinacanbeidentified,andcanbeusedinquantitativeanalysisofretinaganglioncells.Keywords:retina,flattening;animals,laboratory收稿日期:2001209229视网膜平铺片用于多种研究之中,包括视网膜逆行标记节细胞定量研究,单个节细胞的定位注射,以及某些电生理研究和免疫组化研究[1～5]。有些研究需要在视网膜铺片后确定方向,以便更加精确。目前,如何使用简单方法将视网膜平铺,并能很好地确定视网膜的方向,详细介绍的还不多。我们通过多次实验,找到了一种简单准确的大鼠视网膜定向铺片方法,现介绍如下。1材料与方法实验动物选用SD大鼠12只,体重200～250克,眼部检查无异常。将大鼠分为3组,每组4只。采用腹腔注射过量6%水合氯醛处死动物,有齿镊夹少量碳素在上方球结膜处夹2～3下,使碳素附着在该处球结膜上,取出眼球。第一组不固定,第二组置于4%多聚甲醛011MPBS固定1～12小时,第三组置于4%多聚甲醛011MPBS固定24小时以上。在碳素标记相应部位的后巩膜处再次标记碳素,见图1。沿角膜缘后015mm剪开,去掉角膜和晶状体,呈现出眼杯。左手用有齿镊夹住标记处后巩膜组织,右手用结膜剪在对侧分离视网膜。在视盘处将视网膜与其下面紧贴的组织剪开,继续分离,此时视网膜自然卷曲呈纺锤状,尖端指向标记处。将卷曲的视网膜放置在载玻片上,指向标记处的尖端放在上方,见图2。这样根据左右眼就可以确定视网膜的上下鼻颞4个方向。沿鼻上、鼻下、颞上、颞下四个方向剪开视网膜并逐渐展平。将视网膜暴露在空气中自然干燥,可见到视网膜逐渐变得透明,约30分钟左右,视网膜全部变得透明,见图3。此时就可用于拍片,视网膜平整,满足拍摄照片的需要。2结果不固定组视网膜比较软,分离困难,易于碎裂,第一组8只眼球中,6只视网膜碎裂,不能全部完整832眼科2002年第11卷第4期OphthalmolCHN,2002,Vol11,No.4铺平,2只眼的视网膜中有裂孔,部分视网膜丢失。固定1～12小时组分离容易,8只眼的视网膜铺片平整,如图3。固定24小时以上组易于分离,铺平后边缘卷曲,不断切去卷曲的视网膜边缘,最后8只眼球的视网膜所剩大小不一。3讨论视网膜铺片并不是一个复杂的技术,但需要掌握一定的方法才能使铺开的视网膜平整,并且很好地确定出方向。有些研究人员用角膜缘缝线的方法确定视网膜的方向,但在剪开角膜缘后,缝线处就被剪掉,使得后面的视网膜方向容易搞混。有些再次在后巩膜处缝线标记,这样比较浪费时间。我...
