第一部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌1．大肠杆菌属于革兰氏________性菌，为________型的肠道杆菌。2．结构：属于________生物。3．用途：是在________技术中被广泛采用的工具。4．与人类的关系：它生活在人类的________中，一般对人________(“有”还是“无”)害。有一些菌株对人体能产生危害，因为它们可以侵蚀________并产生________。任何大肠杆菌如果进入人的________系统，都会对人体产生危害。答案：1.阴兼性厌氧2．原核3．基因工程4．肠道无肠黏膜毒素泌尿二、细菌的培养和分离1．细菌的培养：(1)细菌的繁殖：细菌以________的方式繁殖，分裂速度很快，约________分裂一次。(2)培养细菌的方法：培养细菌，需要将________________________________________________________________________转移到________中，一般用________来转移带菌的培养物。(3)用不同培养基培养细菌的差别：接种方法接种后培养的时间(单位：小时)培养结果接种环直接接种培养8h后每毫升培养基中有________个细菌________________________________________________________________________的方式接种(该法还可以用于______)培养10～20h后一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞，这些细胞________________________________________________________________________________，形成____________________________________________________________2.细菌的分离：(1)分离的方法与特点：分离细菌有________和________2种。前者方法简单，后者操作复杂，但是______________________________________________________________更易分开。(2)本实验进行大肠杆菌分离，是用________法，就是在________培养基上进行细菌的________。答案：1.(1)分裂20min(2)已有细菌的培养物新的培养基接种环(3)几亿划线分离细菌紧紧聚集在一起菌落2.(1)划线分离法涂布分离法单菌落(2)划线分离固体平面划线培养三、灭菌操作1．灭菌操作的原因：为了获得________的培养物，其关键是防止外来________的入侵污染。因此，在培养微生物时必须进行________操作。2．无菌操作的条件：(1)首要条件是________必须是无菌的；(2)________必须是无菌的；(3)________的过程必须是无菌的等。答案：1.纯净杂菌无菌2．(1)各种器皿(2)各种培养基(3)菌转移操作四、大肠杆菌的培养和分离实验1．实验目的：(1)进行大肠杆菌的________，利用________培养基进行细菌培养的操作；(2)进行大肠杆菌的________，用________培养基进行细菌的________培养；(3)说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。2．实验步骤(1)灭菌：用________在________压力下对LB液体培养基、LB固体培养基和培养皿进行灭菌________min。(2)自________向________中转移并分装固体培养基：待冷却至______左右，将三角锥形瓶中的______培养基，在______上分装至几个______中，制成______培养基。(3)将大肠杆菌自________转移到________中的________培养基中培养：将大肠杆菌用________在无菌操作下接种至三角锥形瓶中的________培养基中，在________摇床振荡培养________，完成大肠杆菌的培养。(4)将菌液在________培养基上进行________分离：从前一步培养得到的菌液中获取菌种，用________以__________法接种至第二步所制得的__________培养基中，在________℃恒温箱中培养________h后观察菌落。(5)菌种保存：在无菌操作下将________用________取出，再用________法接种在________上，________培养________后，________冰箱保存。3．分离实验的结果及相应结论：观察中若看到在________的末端出现________，则表明菌已被分离了。4．大肠杆菌分离的用途：________的通用方法，也是用于________的最简便方法之一。答案：1.(1)扩增液体(2)分离固体平面划线2．(1)高压锅1kg15(2)三角瓶培养皿60℃固体超净台培养皿固体平面(3)斜面三角瓶液体接种环液体37℃12h(4)固体平面划线接种环划线固体平面3712～24(5)单菌落接种环划线斜面37℃24h4℃3．划线不连续的单个菌落4．消除污染杂菌筛选高表达量菌株
