脉动中维生素C的检测1实验仪器与试剂1.1仪器岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机1.2试剂维生素C标准品、醋酸、超纯水、脉动2实验方法与原理维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等，但是维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，且适用范围广，特别对高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析具有极大的优势。能在较短时间内完成对维生素C含量的测定。在以维生素C标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素C含量。（1）标准曲线方程式为：Y=aX+b（2）根据标准曲线方程得到计算公式：X1=(Y1-b)/a（X1为样品中维C浓度，Y1为样品峰面积）（3）最后求出：C1=X1×N（C1为1ml脉动的维C含量，N为所取脉动稀释倍数=100ml/所取脉动体积）3实验步骤3.1标准液的制备维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至50mL，为标准溶液。分别吸取标准溶液0.05，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样测定。3.2样品的前处理试样处理试样为液体时，吸取适量体积试样原液用20mL0.5%醋酸溶液作为稀释液，再用水定容至100mL;试样为固体时，称取试样1g用0.1%醋酸溶液溶解(按照试样液中维生素C含量0.5~700mg/L换算)，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至100mL，过滤，用0.45m滤膜过滤，进样。3.3实验条件的选择(1)色谱柱C18(250mm*4.6mm)(2)流动相含甲醇：含0.1%醋酸的水（10：90），流量1mL·min-1(3)检测器紫外检测器，262nm(4)进样量20µL3.4测定(1)将配制好的流动相甲醇、0.1%醋酸的水置于超声波发生器上脱气20min。(2)根据实验条件，将高效液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时即可进样。(3)依次分别吸取20µL的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图。4实验结果4.1维生素C标品色谱图0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.5min-50050100150200250300350400450500mV3.162/27069224.2维C标准曲线01002003004005006000200000040000006000000800000010000000120000001656264496942961349550853110660924f(x)=22027.9959903755x+31017.0412079506R²=0.998423240240666浓度（ug/ml）峰面积4.3样品色谱图0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.5min-50050100150200250300350400450500mV3.156/2535692根据色谱图，我们得知峰面积为2535692，代入标准曲线：y=22028x+31017，得x1=113.704μg/mL，因此1ml脉动的维C含量为C1=113.704×5=568.52μg/mL所以100mL脉动中含有56852μg/100mL即56.852mg/100mL5实验结果分析本次实验测得脉动中维生素C含量约为57mg/100mL，比脉动营养声称上的20mg/100mL高出了近三倍，如果先不考虑仪器、操作误差，那极大的可能是商家为了预防储藏中损失，额外添加了比标签上多的维生素C。例如资料显示一个标明每100mL中维生素C含量在25～50mg之间的产品，部分产品的实测数值和标注数值可能相差2～3倍之多，实测维生素C含量为62毫克。因此我们消费者在购买这类维生素C饮料时也要多留个心眼，警惕吸收量超标。因此我们测得57mg/100mL的维生素C含量也不是没有道理。通过本次实验，我了解到，液相色谱法具有许多优点，比如分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广；与气相色谱法相比不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；且流动相种类多，可通过流动相的优化达到高的分离效率；一般在室温下分析即可，不需高柱温。但它的分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相长。在实际操作中，也会有不少因素影响液相色谱仪实验结果的准确性。如手动进样的使用方法不当，就会引起色谱...
