实验五.青贮饲料氨态氮含量的测定准备工作:•两种试剂的配制:试剂A:称取9.976克苯酚,50.65mg亚硝基铁氰化钠,用去离子水定容至1000ml。试剂B:称取5.0克氢氧化钠溶于去离子水,再加13.5ml次氯酸钠,最后定容至1000ml。一、实验仪器及试剂•仪器:分光光度计,水浴锅,移液枪(1ul)及移液管(10ml,5ml),容量瓶,烧杯,试管若干。•试剂A,B,0.2mol/l的盐酸溶液(取12ml盐酸定容至1000ml),氯化铵二、实验步骤•取待测液2.0ml(空白加蒸馏水)放入试管中,每个样3个重复,加入8ml0.2mol/l的盐酸溶液混匀。•取混合液0.4ml于另一试管中,以次加入A,B液各5.0ml。•60℃恒温水浴10min,反应结束后于冷水中冷却。•在560nm处测溶液的吸光度值。三、标准曲线的绘制•称取1.00克NH4Cl用去离子水溶解后定容至100ml,配制成浓度为10mg/ml的标准母液。•分别取0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0ml母液于100ml容量瓶中,配成一个系列的标准液。•。•取各标准液2.0ml于试管中,每个标准3个重复,加入8.0ml,0.2mol/l盐酸混匀再取0.4ml混合液于另一试管中,依次加入A液5.0ml和B液5.0ml,60℃恒温水浴箱中反应10min。•反应结束后,立即取出于冷水中冷却,在560nm波长处测OD值。•以NH4Cl浓度为横坐标,OD为纵坐标,绘制NH4Cl标准曲线。四、计算方法•将待测液所得的吸光度值带入标准曲线中,得出氯化铵的浓度,将其转化为氨态氮的浓度,然后根据浸出液所取得样品重量以及加入水的重量,计算出青贮料单位干物质中含的氨态氮量。•氨态氮含量(g/kgDM)=所得的氯化铵的浓度×17/53.5/1ml待测液对应青贮料干物质的量五、注意事项•每一步加完溶液都要摇匀,使其反应完全。•水浴后冷却摇匀再比色。•计算结果注意单位。