课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段[学业水平层次(A)]1．下列有关PCR描述，不正确的是()A．是一种酶促反应B．引物决定了扩增的特异性C．扩增对象是DNA序列D．扩增对象是核糖核苷酸序列【解析】PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，故D错。【答案】D2．下列关于DNA复制和PCR的描述中，正确的是()A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链B．DNA复制不需要引物C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合D．PCR扩增的对象是核糖核苷酸序列【解析】由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物，而且它与DNA母链通过碱基互补配对结合。PCR扩增的对象是DNA，而不是RNA。【答案】C3．在PCR实验操作中，下列说法不正确的是()A．在微量离心管中添加各种试剂时，只需要一个枪头B．离心管的盖子一定要盖严，防止液体外溢C．用手轻弹离心管壁的目的是使反应液充分混合D．离心的目的是使反应液集中在离心管底部，提高反应效果【解析】在微量离心管中添加各种试剂时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换，确保实验的准确性；离心管的盖子一定要盖严，防止实验中脱落或液体外溢；离心的目的是使反应液集中在离心管底部，提高反应效果。【答案】A4．下列操作过程的叙述中错误的是()A．PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌B．PCR所用缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化C．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20℃储存D．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换【解析】PCR所用缓冲液和酶从冰箱拿出之后，应放在冰块上缓慢融化，这样才能不破坏缓冲液中稳定性较差的成分，同样保护酶的活性不被破坏。【答案】B5．退火温度是影响PCR特异性的较重要的因素。变性后温度快速冷却至40～60℃，可使引物和模板发生结合。PCR的结果可不考虑原来解旋开的两个DNA模板链的重新结合，原因不包括()A．由于模板DNA比引物复杂得多B．引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞C．加入引物的量足够多而模板链数量少D．模板链加热解旋已经变性不可能再次结合【解析】DNA分子在94℃左右的温度范围内双螺旋结构解体，双链打开，在DNA分子复制时提供模板，这个过程称为变性。当温度缓慢降低到40～60℃时，两条解聚的单链分别与引物结合，称为退火，故D项阐述错误。【答案】D[能力提升层次(B)]6．在PCR扩增的实验中，加入一种提取物(一种模板DNA片段)，但实验得到的产物却有2种DNA。其原因可能是()A．引物不足B．TaqDNA聚合酶发生变异C．基因污染D．温度过高【解析】这是由于实验操作不当，混入了杂质DNA，造成污染的结果。因此，在PCR实验中，一定要做到隔离操作区、分装试剂、简化操作程序、使用一次性吸液枪头、灭菌等。【答案】C7．使用PCR仪的具体实验操作顺序应为()①设计好PCR仪的循环程序②按配方准备好各组分③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分④进行PCR反应⑤离心使反应液集中在离心管底部A．②③⑤④①B．①⑤③②④C．②③⑤①④D．④②⑤③①【解析】PCR反应的操作步骤一般分为准备(包括配制配方及将各配方放于实验台上)→移液→混合→离心→反应。因PCR仪是一种自动控制温度的仪器，设计好循环程序就可以进行反应了。【答案】C8．PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物I延伸而成的DNA单链作模板时将()A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链延伸D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链【解析】当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时，此单链引物端为5′瑞，因此与它互补的子链应从另一端开始合成，即由引物Ⅱ结合延伸DNA的子链。【答案】B9．(2015·长沙高二检测)PCR利用了DNA热变性的原理，PCR仪实际上也是一种能自动调控温度的仪器，对PCR过程中“温度的控制”的说法错误的是()A．酶促反应需要高的温度，是为了确保模板是单链B．延伸的温度必须大于复性温度，而小于变性温度C．DNA聚合酶具有耐高温的能力D．...
