大肠菌群检测过程中可能遇到的常见问题及解答一、常用检测标准GB/T4789.3-2003食品卫生微生物学检验大肠菌群测定GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.28-2013食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB4789.1-2016食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB4789.41-2016食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆科检验GB/T27405-2008实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T16294-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法二、常见问题及解答（一）检测方法选择Q1：食品中大肠菌群的检测有两个标准三种方法，该如何选择呢？A：依据产品标准的项目单位1、若单位为CFU/g,则选择GB4789.3-2016第二法（平板计数法）。如:GB19300-2014食品安全国家标准坚果与籽类食品；2、若单位为MPN/g,则选择GB4789.3-2016第一法（MPN计数法）。如:NY/T1885-2017绿色食品米酒；3、若单位为MPN/100g，则选择GB/T4789.3-2003。如：Q/KSJ0001S-2018果蔬脆片。Q2：MPN法3个适宜的连续稀释度该怎样选择？A：依据产品标准的项目标准值1、若标准值为V3.0MPN/g,则选择0.1g、0.01g、0.001g三个稀释度。如:NY/T1885-2017绿色食品米酒；2、若标准值为＜30MPN/100g,则选择1g、0.1g、0.01g三个稀释度。如:Q/KSJ0001S-2018果蔬脆片。1g由接种10mL0.1g/mL至双料乳糖胆盐发酵管得来。（二）样品采样方法Q3：怎样采样，才能使样品具有代表性？A：这里将样品分为两类：预包装食品和散装食品或现场制作食品。1、对于预包装食品A、应采集相同批次、独立包装、适量件数的食品样品，每件样品的采样量应满足微生物项目检验的要求。B、独立包装WIOOOg的固态食品或WIOOOmL的液态食品，取相同批次的包装。C、独立包装＞1000mL的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其达到均质后采集适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品；＞1000g的固态食品，应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品。2、对于散装食品或现场制作食品用无菌采样工具从n个不同部位现场采集样品，放入n个无菌采样容器内作为n件食品样品。每件样品的采样量应满足微生物项目检验单位的要求。（三）物资准备Q4：结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）使用前不需要高压灭菌，是否会存在污染的可能？A：大肠菌群是不能形成芽抱的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以不会从培养基带入污染。当然盛装培养基的容器需要进行高压灭菌，以免容器引入污染。此外，VRBA是一种选择性培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵验证，因此VRBA培养基就无需高压灭菌。但需要注意的是，VRBA需要现配现用，完成配制的培养基应当在3h之内使用完毕。Q5：MPN管灭菌后为什么小导管内会有气泡以及该如何解决？A：原因一：过早打开灭菌锅当灭菌锅压力表降为0而温度表示数还高于室温时，不要打开灭菌锅。因为打开锅盖瞬间，锅内大量热量散出，温度突然降低，试管内温度也随着降低，导致管内气压减小，沸点降低，部分水会汽化留在小导管内。解决措施：待灭菌锅内气压和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。原因二：试管塞塞得太紧（使用硅胶塞的时候）试管塞塞得太紧在灭菌时会导致试管内与灭菌锅内压力不一致。在灭菌锅升温升压时,锅内压力会大于管内压力。锅内压力会大于管内压力时，试管内压力不够，不能将小导管内气体排尽，就留有气泡；试管塞塞得太紧同样会导致灭菌锅降温降压时，锅内压力小于管内压力。锅内压力小于管内压力时，可能会使试管塞和培养基崩出，培养基报废。解决措施：改用透气性好的棉花塞，切勿使用橡皮塞。原因三：小导管口径太小我们把一根毛细管一端封口，另一端插进水里，毛细管里怎么都不会进水。同样把一个烧杯倒扣进水里就很容易进水了。小导管在加压后一方面水要进去，另外里面的空气要出来,如果口太小的话，空气不容易出去，水也不容易进来，就会导致气泡留在里面。解决措施：改用内径较大的导管，尽量使用V型管，不...
