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结核分枝杆菌快速诊断试剂盒VIP免费

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FASTPlaqueTBTM—结核分枝杆菌快速诊断试剂盒(噬菌体法)使用说明ManualofFASTPlaqueTBTMMycobacteriumtuberculosisDiagnosticKits上海金浩科技发展有限公司BIOTECLaboratoriesLimited(UK)1、使用目的FASTPlaqueTBTM试剂盒为一种体外诊断试剂,用于检测待检标本中是否存在活的结核分枝杆菌。2、背景肺结核是一种因感染结核分枝杆菌(MTB),偶尔为牛分枝杆菌,非洲分枝杆菌而引发的传染病,在低收入地区发病率相对较高。据WHO统计,全球约1/3的人口感染MTB,每年新增患者900万,并有300万人死于该病。目前对结核病诊断主要依靠实验室诊断与临床体症相结合。实验室诊断主要包括涂片法、培养法、分子生物学方法、免疫学方法和噬菌体法。痰涂片直接镜检是检测抗酸杆菌(AFB)最普遍的实验室诊断方法,特异性较高,但灵敏性较低,涂片中分枝杆菌要达到103~104cfu/ml才可检测出阳性结果,且仅能检出1/2~3/4的活动性结核患者,漏检率相当高;罗氏(L?wensteinJensen)培养法是目前检测MTB的“金标准”,但其检测周期长(8周),导致无法及时确诊结核患者,并无法及时治疗;新近发展起来并广泛使用的快培检测技术无疑大大缩短了检测周期,但确诊仍需2~3周,依然无法实现结核病快速诊疗;基于免疫学的检测方法快速,操作简单,成本低廉,但灵敏度有限;而基于核酸扩增的检测方法快速、准确,但成本高昂、技术要求高,难以在发展中国家常规实验室中广泛开展。很显然,临床实验室急需一种快速、准确、经济,易推广的检测方法用于结核病的检测。3、测试原理FASTPlaqueTBTM试剂盒采用噬菌体扩增方法检测待检标本中是否存在活的结核分枝杆菌。痰液标本首先经去污染处理,杀灭痰液中其它杂菌,随后用特异性噬菌体迅速感染结核分枝杆菌,再添加杀毒剂杀灭未感染结核分枝杆菌的噬菌体。经杀毒剂处理后,仅有MTB胞内的噬菌体存活并复制,直至MTB细胞裂解,释放噬菌体。随后,复制的噬菌体感染随即添加的敏感细胞中继续快速扩增。新复制的噬菌体依次经历感染、复制和裂解的循环过程,在敏感细胞生长区域出现清晰可见的噬菌斑。平皿中噬菌斑数目与标本中MTB数目成正相关,如标本中不含MTB,则经杀毒剂处理后,痰液中无噬菌体存活,故实验结束时敏感细胞菌苔上无噬菌斑出现。acillus敏感细胞敏感细胞敏感细胞敏感细胞斑点的出现表明标本中含有活的结核分枝杆菌4.试剂和仪器每个试剂盒含10个测试所需试剂,每个包装内含5个试剂盒,即50个测试所需试剂。4.1试剂盒组分每个FASTPlaqueTB?试剂盒应包含以下组份:试剂A(FPTBMedium)1(袋)FPTB培养基试剂B(GrowthSupplement)1(瓶)FPTB生长补充剂试剂C*(FPTB完全培养基)使用时,无菌条件下将试剂B加入无菌已冷却的试剂A溶液中,制得试剂C液.试剂D(Actiphage)1(瓶)冻干Actiphage噬菌体试剂E(SensorCells)1(瓶)冻干敏感细胞试剂F(Virusol)1(瓶)杀病毒剂试剂G(FPTBAgar)1(袋)FPTB琼脂培养基干粉反应管10(个)产品说明书1(份,英文)4.2其它试剂和仪器噬菌体结核分枝杆菌培养过夜杀病毒剂处理噬菌体在分枝杆菌细胞内复制4.2.1其它试剂NALC-NaOH(或3%NaOH)消化液;pH6.8的PBS溶液(相当于0.067mol/L)。4.2.2设备和仪器生物安全柜、旋涡振荡器、离心机(4000rpm,50ml)、移液枪及配套枪头(100ul,1000ul)、水浴设备(56℃)、高压蒸汽杀菌设备、恒温培养箱(37℃)、90mm无菌培养皿、三角瓶(300ml,500ml)、移液管、生物安全罩衣、一次性手套、一次性容器等。4.3试剂盒运输、贮藏条件及有效期4.3.1运输条件试剂盒应在2~8℃条件下运输。4.3.2贮藏条件及保质期复溶前:所有试剂应按相应要求贮藏。复溶后:FPTB基本培养基(试剂A)、琼脂培养基(试剂G)贮藏于25℃下,有效期4周;FPTB完全培养基(试剂C)贮藏于2~8℃,有效期4周;噬菌体(试剂D)溶液,敏感细胞(试剂E)溶液,杀病毒剂(试剂F)溶液均贮藏于2~8℃,有效期7天。5.试剂盒中试剂复溶及其它试剂配制试验前,按如下要求复溶试剂盒中所含试剂,并按要求贮存。5.1试剂盒中试剂配制5.1.1FPTB培养基(试剂A)将袋装试剂A加入270ml蒸馏水中,充分混匀,溶解,121℃灭菌10min,...

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