细胞工程的基本技术VIP免费

细胞融合与单克隆抗体学习目标1.掌握动物细胞融合技术2.理解单克隆抗体技术。[重、难点]3.了解动物细胞融合和单克隆抗体技术的应用。[重点]“太空烟草”“神舟”四号飞船上进行了包括曾被广泛关注的细胞“太空婚礼”——植物细胞和动物细胞两项空间细胞融合试验：黄花烟草原生质体和“革新”一号烟草原生质体的融合、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合两个科学实验，在电融合仪内经过160分钟后，终于获得成功。(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图过程示意图杂种植株融合的原生质体AB再生出细胞壁脱分化愈伤组织再分化植物细胞的融合植物组织培养植物细胞A原生质体B原生质体A杂种细胞AB去壁去壁人工诱导方法？促进融合的方法？融合完成的标志植物细胞B植物体细胞杂交技术过程动物细胞与植物细胞的差别：•无细胞壁•全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：•不需去除细胞壁•不能发育成新的动物个体一、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂5、动物细胞融合过程5、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体传统的抗体生产办法及缺陷是什么？抗体由什么细胞产生？B淋巴细胞每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群1975，米尔斯坦和柯勒杂交瘤技术设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞细胞抗原细胞细胞记忆细胞抗体吞噬细胞TB浆摄取处理传递增殖分化分泌增殖分化特异性结合2.制备过程：诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法1、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。2、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A2..动物细胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服远缘杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新品种D.生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成...