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人类免疫缺陷病毒I型HIVRNA核酸定量检测SOPVIP免费

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人类免疫缺陷病毒(I型)核酸定量检测系统标准操作程序1.目的:规范超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒(HIV-IRNA)的检测过程,确保检测结果的准确性和重复性。2.检测方法和原理2.1检测方法:TaqMan探针荧光定量PCR法。2.2检测原理:人类免疫缺陷病毒(I型)核算定量检测试剂盒(PCR-荧光法)采用核酸扩增技术,定量检测人血浆中HIV-IRNA。该方法包括三个主要步骤:(1)样品制备以分离HIV-IRNA;(2)靶RNA的逆转录形成互补DNA(cDNA);(3)靶(cDNA)的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。3.标本要求3.1标本类型:血浆(EDTA抗凝)。3.2标本的采集与处理3.2.1标本采集量:采集患者静脉血6mL(EDTA抗凝真空采血管)。3.2.2标本处理:标本采集后应在2小时内送至实验室,实验室收到标本后在1小时内处理标本。“年月日6位数字+标本号3位数字”,例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为:“180101401”。℃)最多存储1天;2-8℃最多存储6天;-20℃—-80℃℃冰箱。已检血浆置-80oC冰箱保存2个月,到期后按科室有关程序作废弃标本处理。4.仪器和试剂4.2试剂:(配套封闭试剂)4.2.1试剂盒(包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR检测试剂组分)保存于2-8℃环境下,有效期22个月。℃条件下不超过30天。4.2.4主要组成成份:组份名称规格数量质控品阴性质控品1000μL/管1临界阳性质控品1000μL/管1强阳性质控品1000μL/管1HIV2CS148测试1HIV2CS248测试1HIV2CS348测试1HIV2CS448测试15.标准操作5.1COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48的配置如下:配置实验所需的架子和耗材相应位置COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48a.K-tubes放在样本架上b.带有K-tips的K-tip架c将带有样本或质控的S-tubes放在样本架上d.带有SPUs的SPU-架e.CS1放在一个试剂架f.CS2,CS3,CS4放在一个试剂架F-HM-PF-HJ-LAB-EM-P(M-P)g.将空的K-carrier放在K-carrier架上样本核酸提取完成后:K-carrier上的K-tubes手工转移6.2.COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48上使用试剂及耗材的保存及注意事项:1).所有试剂(HIV-Itest试剂)2-8℃保存,即拿即用;2).试剂启用后,可保存28days(2-8℃);3).试剂启用后,在CobasAmpliprep上累计使用时间最多64hrs;4).CTM(-)阴性质控、L(+)弱阳性质控、H(+)强阳性质控,使用后的废弃;5).洗液2-30℃保存,打开后可使用28days;6).耗材(S-tube/样本条码/K-tip/K-tube/SPU)常温保存。6.3.COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48上使用样本的保存及注意事项:1).需要的样本为血浆;2).血样在2~25℃下运输,24hrs内(HIVRNA)收集出血浆(室温800-1600g离心20分钟);3).HIVRNA检测:血浆可在室温下(25-30℃)保存最多1天,在2~8℃最多保存6天,或者-20~-80℃下长期保存,至少6周;4).血浆建议倒取1100-1200μL进行保存;5).血浆冷冻时,最多冻融5次不损失HIVRNA。6.4.COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48HBVDNA定量检测操作流程:A仪器初始化及维护A1打开COBASAmpliPrep和COBASTaqMan开关,等待仪器初始化完成,为stand-by状态A2登陆电脑及AMPLILINK软件登陆Windows?XP操作系统(UserID和password)a)双击桌面上AMPLILINK软件图标b)登陆AMPLILINK软件(UserID和password)A3通过软件Status界面检查洗液量是否足够,如不够需要更换新的洗液A4检查软件维护界面Due按钮下列出的需要进行的维护内容,按照维护手册进行相应内容的维护工作,COBASAmpliPrep仪器自动进行系统初始化工作B加载试剂将所有试验需要的试剂匣从2-8°C冰箱拿出,立即放在试剂架上并放入COBASAmpliPrep仪器中,试验开始前在仪器上平衡至少30分钟。不要将试剂匣放在仪器外进行温度平衡,以免在试剂匣表面形成水凝结,造成条码的损坏。如果在试剂匣表面有水凝结,不要对条码部位进行擦拭,以免损坏条码造成仪器无法对条码进行辨识。B1将CS1试剂匣放在一个试剂架上,将试剂匣CS2,CS3和CS4放于另一个试剂架上B2将放有CS1的试剂架放入到COBASAmpliPrep仪器中的A位置B3将放有CS2,CS3和CS4的试剂架放入到COBASAmpliPrep仪器中的B、C、D、E的任一位置C加载耗材注意:根据检测的样本数计算需要的COBASAmpliPrep试剂匣数...

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