酶促反应动力学实验报告VIP免费

酶促反应动力学实验报告实验目的：1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的 Km 值实验原理：一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、pH 及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度(v)随底物浓度［S］的增加而迅速增加，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度 Vmax)。底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示杨恩原1_心 1 丄 1V 隘[S](Michaelis-Menten 方程)即：X/■KE十,式中Vmax为最大反应速度Km为米氏常数［S］为底物浓度当 v=Vmax/2 时，则 Km=［S］，Km 是酶的特征性常数，测定 Km 是研究酶的一种重要方法。但是在一般情况下，根据实验结果绘制成的是直角双曲线，难以准确求得 Km 和 Vmax。若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-Burk 方程)，则此方程为直角方程，即:以 1/V 和 1/［S］分别为横坐标和纵坐标。将各点连线，在横轴截距为-1/Km，据此可算出 Km 值。本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性,再根据 1/v和 1/［S］的倒数作图，计算出其Km 值。二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，成为酶的抑制剂。酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的 Km 值增大，但对酶促反映的最大速度 Vmax 值无影响。非竞争性抑制剂的作用特点是不影响［S］与酶的结合，故其 Km 值不变，然而却能降低其最大速度 Vmax。本实验选取 NaHP0 作为碱性磷酸酶的抑制物，确定其抑制作用属于哪种类型。24实验步骤：实验一:底物浓度对酶促反应速度的影响管号试剂(1)(2)(3)⑷(5)⑹(7)⑻(9)0.01mol/L 基质液(ml)011111224蒸脩水（ml）4765434201.取试管 9 支，将 L 基质液稀释成下列不同浓度:试剂123456789吸聖上表稀释基质液 1ml⑴(2)(3)⑷(5)(6)(7)C8)⑼pH10 碳酸钠缓冲液(ml)0.90.90,90.90.90.90.90.90.92.另取 9 支试管编号，做酶促反应:酶液(ml)0」0.1(M0」0」0」0.10」0」pHlQ 碳酸钠缓冲液(ml)010/1610/14 10/12101010/810/610/410/23.混匀，37°C 水浴保温 5 分钟左右。4.加入酶液后立即计时，各管混匀后在 37C 准确保温 15...