1.1DNA 重组技术的基本工具专题 1 基因工程福建顺昌金桥学校吴程凯DNA 重组技术的基本工具 “ 分子手术刀”限制性核酸内切酶DNA 连接酶基因进入受体细胞的载体“ 分子缝合针”“ 分子运输车”CTTCATGAATTCCGTATGGATCCTAA GAAGTACTTAAGGCATACCTAGGATT EcoRⅠ 限制酶酶切位点GGCATCCTAG AATTCCGTAGCTTCATG GAAGTACTTAABamHⅠ 限制酶酶切位点 GATCCTAA GATT“ 分子手术刀” --- 限制酶 DNA 连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位？“ 分子缝合针”DNA 连接酶CTTAAGAATTCG磷酸二酯键基因的载体质粒， λ 噬菌体的衍生物，动植物病毒等。“ 分子运输车”载体必须具备的条件：3 、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）2 、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；1 、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；4 、对受体细胞无害。载体的作用：1 、将外源基因转移到受体细胞中去。2 、利用载体在受体细胞内对外源基因进行大量复制。常用的载体有：模拟 DNA 重组技术，探究载体的特点探究一：如果条件充分，此时我们得到的目的基因和载体是否能够成功连接？探究二：将多个 EcoRI 酶切后的载体与目的基因混合后，加入 DNA 连接酶，其连接产物可能有哪些种？请大家尝试操作。 2 、载体与载体之间的连接1 、目的基因与目的基因之间的连接4 、载体自身环化 3 、目的基因自身环化5 、载体与目的基因之间的连接同向插入反向插入目的基因插入方向不同，将导致出现不同的基因产物探究活动：模拟重组 DNA探究一：如果条件充分，此时我们得到的目的基因和载体是否能够成功连接？探究二：将多个 EcoRI 酶切后的载体与目的基因混合后，加入 DNA 连接酶，其连接产物可能有哪些种？请大家尝试操作。探究三：我们如何解决目的基因定向插入这个问题呢？ 两种限制酶切割产生的黏性末端不同载体与载体间，目的基因与目的基因间仍可连接载体及目的基因无法自身环化得出结论：载体上含有多个酶切位点，利用双酶切的方法，可以保证目的基因的定向插入，同时还避免了载体及目的基因的自身环化，提高 DNA重组率，实现目的基因的正确转录和表达。探究四：前面操作中，载体与载体重组得到的DNA ，载体与目的基因重组得到的 DNA 上都有标记基因（如氨苄青霉素抗性基因），如何筛选出含目的基因的重组 DNA 呢？如果将一个标记基因（四环素抗性基因）放在目的基因的插入位...
