1High-Fidelity PCRHigh-Fidelity PCRHigh-Fidelity PCRHigh-Fidelity PCR 2Review• The most important source of PCR product contamination is the generation of (_______________________) that is associated with the post-PCR analysis.aerosols of PCR amplicons 3PCR管移液器手套离心机高压锅超静台冰箱超纯水机烘箱 4• 以前 PCR 产生的扩增子的回馈污染，是主要的污染源。• 控制污染• 实验室应有紫外灯；在超静工作台里配 PCR 反应液；操作中总是带手套；使用正确放置的移液器和枪头、试剂等用品 . 5污染源• 污染可来自几个不同的污染源 :• (1) 质粒的扩增与纯化 (2) 模板基因组 DNA 的反复分离 (3) 以前扩增的分子 (PCR 片段 ) （产物污染）交差污染（如气溶胶从一个阳性标本扩散到原本阴性的标本） (4) 试剂污染（贮存液或工作液） 6如何避免污染？ PCR 活动 : 前 PCR ( 样本制备和 PCR 的准备 ) 后 PCR (PCR 进行与 PCR 产物分析 )• 避免方法：将 DNA 样本制备 , PCR 反应液的配制以及 PCR 过程和 PCR 产物的分析都分别指定在实验室的不同区域里完成。• • PCR 活动的时空隔离 7PCR 实验室的装备 • 为保证前 -PCR 活动和 后 -PCR 活动的隔离， 每个区域都应该有专门的装备，包括移液器及枪头、试剂、移液器架等。 81 、 PCR 实验室区域隔离图Fig.2 9样本制备实验台超静工作台冰箱离心机造水机正压前 PCR区高压锅烘箱 10• 2 、使用带过滤屏障的枪头• 3 、实验室的日常安排 • 4 、实验室的环境处理• 5 、酶核酸酶 DNase I;UDG 尿嘧啶 -DNA- 糖基化酶• 6 、试剂灭菌• 7 、配制最大反应液• 8 、使用阳性和阴性对照 11Contamination Control Program • The essential parts of this contamination control program include space and time separation of pre- and post-PCR activities, use of physical aids, use of ultraviolet (UV) light, use of aliquoted PCR reagents, incorporation of positive and negative control 。 127 、配制最大反应液• PCR 有几个平行反应，在一管里配制最大反应液，其中有水 , buffer, dNTPs, 引物 和 Taq DNA 聚合酶，混匀后被等分到不同 PCR 管里 . MgCl2 和 模板 DNA 再分别加。...
