1High-Fidelity PCRHigh-Fidelity PCRHigh-Fidelity PCRHigh-Fidelity PCR 2Review• The most important source of PCR product contamination is the generation of (_______________________) that is associated with the post-PCR analysis
aerosols of PCR amplicons 3PCR管移液器手套离心机高压锅超静台冰箱超纯水机烘箱 4• 以前 PCR 产生的扩增子的回馈污染，是主要的污染源
• 控制污染• 实验室应有紫外灯；在超静工作台里配 PCR 反应液；操作中总是带手套；使用正确放置的移液器和枪头、试剂等用品
5污染源• 污染可来自几个不同的污染源 :• (1) 质粒的扩增与纯化 (2) 模板基因组 DNA 的反复分离 (3) 以前扩增的分子 (PCR 片段 ) （产物污染）交差污染（如气溶胶从一个阳性标本扩散到原本阴性的标本） (4) 试剂污染（贮存液或工作液） 6如何避免污染
PCR 活动 : 前 PCR ( 样本制备和 PCR 的准备 ) 后 PCR (PCR 进行与 PCR 产物分析 )• 避免方法：将 DNA 样本制备 , PCR 反应液的配制以及 PCR 过程和 PCR 产物的分析都分别指定在实验室的不同区域里完成
• • PCR 活动的时空隔离 7PCR 实验室的装备 • 为保证前 -PCR 活动和 后 -PCR 活动的隔离， 每个区域都应该有专门的装备，包括移液器及枪头、试剂、移液器架等
81 、 PCR 实验室区域隔离图Fig
2 9样本制备实验台超静工作台冰箱离心机造水机正压前 PCR区高压锅烘箱 10• 2 、使用带
