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华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名林 鸿 锦学号专业综合理科二班年级、班级07 级课程名称生物化学实验实验项目脂肪酸的β —氧化实验类型□验证 □设计 □综合试验时间2008 年 11 月17 日实验指导老师陈 文 利实验评分一、目的通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β- 氧化作用的方法及其原理。二、原理在肝脏内脂肪酸经β- 氧化生成乙酰辅酶A，两分子乙酰辅酶A 缩合成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β- 羟丁酸和丙酮总称为酮体。本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性条件下， 丙酮与碘生成碘仿。反应式如下：COCHCHOHCOCOOHCOCHCHH2COOHCHOHCHCHHOHCHCOOHCHCH2H-COOHCHCHCH332223233223丙酮脱羧丁酸剩余的碘可用标准Na2S2O3滴定：根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。三、材料、试剂和仪器（一）材料新鲜兔肝（二）试剂1、0.1%淀粉溶液（溶于饱和NaCl）2、0.5mol/L丁酸溶液3、20%三氯乙酸溶液4、10%氢氧化钠溶液5、10%盐酸6、0.1mol/L碘溶液7、标准 0.02mol/L硫代硫酸钠溶液8、1/15mol/L ，pH7.6 磷酸盐缓冲液（三）器具1、 漏斗2、 碘量瓶3、 试管及试管架4、 移液管（ 5mL， 10mL）5、 碱性滴定管6、 恒温水浴锅四、实验过程（一）肝匀浆的制备实验室已准备好新鲜的兔肝匀浆以及煮沸过的兔肝匀浆。（二）酮体的生成取大试管两支，分别编号，按下表操作。（单位： mL）大试管编号A B 加入新鲜肝匀浆-- 2.0 加入预先煮沸肝匀浆2.0 -- 加入 pH7.6 磷酸缓冲液3.0 3.0 加入正丁酸溶液2.0 2.0 37℃恒温水浴保温40min 后分别加入20%三氯乙酸，摇匀后室温放置10min。现象及分析溶液呈乳白色，沉淀不明显（煮沸的时候蛋白质已变性）有大量暗褐色沉淀 （与三氯乙酸反应，蛋白质变性）分别过滤，收集滤液，得无蛋白溶液。加入三氯乙酸前的B 试管加入三氯乙酸后（左A 右 B，A 中部分溶液已在过滤）（三）酮体的测定取碘量瓶两只，编号后按下表操作。（单位： mL）碘量瓶编号A B 加入无蛋白溶液5.0 5.0 加入 0.1mol/L碘液3.0 3.0 加入 10%氢氧化钠溶液3.0 3.0 放置 10min，各瓶溶液均呈浅黄色（碘仿颜色）。再分别滴加10%盐酸 3mL，使各瓶溶液中和。现象及分析红棕色较深（碘较多）红棕色较浅（碘较少）用 0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定...