基因工程原理复习题思考题5、 简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。）6、 连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？类型： DNA 连接酶和 RNA连接酶异同点：相同点：都能以DNA 为模板，从5'向 3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。不同点： DNA 聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA 复制中起作用；而RNA 聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。7、 试分析提高平端DNA 连接效率的可能方法。 （传说中的网上答案）1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。3、足够多的载体和插入片段是最重要的。4、平端的连接对于离子浓度很敏感5、尽可能缩小连接反应的体积6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14 度好8、 基因工程中常用的DNA 聚合酶主要有哪些？1）大肠杆菌DNA 聚合酶2）Klenow fragment 3）T7 DNA 聚合酶4）T4 DNA 聚合酶5）修饰过的T7 DNA 聚合酶6）逆转录酶7）Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、 作为基因工程载体，其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源DNA 的载装能力；具有多克隆位点（MCS）；具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。3、 载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒 (plasmid) 、噬菌体 (phage)和病毒 (virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因， 并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。4、 质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？A、 化学法（ CaCl2 法)转化原理：是Ca2+与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构，后者经热脉冲发生收缩作用，使细胞膜出现空隙，质粒或DNA 重组分子便可进入细胞内（感受态细胞）。B、 电穿孔转化转化原理：将待转化的质粒或DNA 重组连接液加在电穿孔转化仪的样品池中，两极施加高压电场，在强大电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜产生缝隙...
