1 BCA 法测定蛋白浓度-酶标仪一、药品1.BCA 蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500 次酶标仪，碧云天），含以下成分：a)BCA 试剂 A （P0012-1，100ml，碧云天），室温保存b)BCA 试剂 B（P0012-2，3ml，碧云天），室温保存c)蛋白标准（ 5mg/ml BSA ）（ P0012-3，1ml，碧云天）， -20 度保存二、仪器和试剂1.酶标仪（测定波长为540-595nm之间， 562nm最佳），水浴锅2.96孔单条可拆酶标板（平底）3.15 ml 离心管 1个（准备 BCA 工作液用）4.1.5 ml 离心管 1个（准备蛋白标准品工作液用）5.单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头6.PBS 三、操作步骤1.水浴锅调至37℃。2.蛋白标准品工作液（1 mg/ml ）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从 -20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。取60μl 蛋白标准品（ 5mg/ml ），加入 240μl PBS，即稀释 5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml ）。3.计算 BCA 工作液总量 = 0.2 ml×（样本数 +8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。BCA工作量按 50体积的 BCA 试剂 A加上 1体积的 BCA 试剂 B配制（即 50:1），需充分混匀。 BCA工作液室温 24小时内稳定。样本数 (n) 1~5 6~7 8~10 11~12 13~14 15~16 17~19 20~21 22~23 24~26 A（ml）6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 B（ml）0.12 0.14 0.16 0.18 0.2 0.22 0.24 0.26 0.28 0.3 总量 (ml) 6.12 7.14 8.16 9.18 10.2 11.22 12.24 13.26 14.28 15.3 4.按下表配制8 个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。单条酶标板蛋白标准品工作液（1 mg/ml ）( l) PBS ( l) 蛋白标准品终浓度(mg/ml) A S0 01000 B S1 5950.05 C S2 10900.1 D S3 20800.2 E S4 30700.3 F S5 40600.4 G S6 50500.5 H S7 10001.0 2 5.将 96 孔酶标板的A1 孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。（1）先在第 3~4 条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8 ）中加入 待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS 液各 18μl，使总量达到 20μl。（此时蛋白样本的稀释比为 10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml 时。如预计蛋白浓度太高或太低，可适当调整稀释比例）（2）再在第 1~2 条酶标板的蛋白标准品孔（S0~S7）中加入上面配制的8 个蛋白标准液各 20μl。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A S0 S0 N1 N1 B S1 S1 N2 N2 C S2 S2 N3 N3 D S3 ...
