问:给定一种抑制剂(I)对某种酶( E)的抑制反应为可逆抑制,设计实验判断该可逆抑制剂为何种类型?答:利用不同浓度抑制存在时,进行E 的动力学参数测定实验,并在同一坐标进行双倒数作图,根据曲线之间的关系来进行抑制反应类型的判断。具体做法:1、 在无抑制剂情况下,设定5 个不同的底物浓度【S】(等差或等比) ,在酶的最适反应条件下,分别测定各个底物浓度下的反应速度V,每个浓度做三次重复;2、 用 0.5μmol/L 的抑制剂进行酶反应抑制,同样在第1 步设定的5 个不同【 S】下,在酶的最适反应条件下,分别测定有I 存在时,各个底物浓度下的反应速度V ,每个浓度做三次重复;3、 用 1μmol/L 的抑制剂进行酶反应抑制,同样在第1 步设定的5 个不同【 S】下,在酶的最适反应条件下,分别测定有I 存在时,各个底物浓度下的反应速度V ,每个浓度做三次重复;4、 用上述反应得到的数据(反应速度V 为三次重复的平均值) ,在同一坐标内进行双倒数作图,并根据做出的图进行抑制类型的判断,判断结果如下:说明:该实验必须做三条以上曲线进行判断,根据计算出的曲线方程, 交点或斜率不一定绝对是同一数值, 但差别在统计误差范围内, 可认为是相同。 因为实验的误差是不可避免的, 实验做得越精确, 误差就越小。 本方法是常用的简单可靠地方法大家的想法理论上都是对的, 但未考虑到误差的影响, 只有两个数据之间进行比较,如果误差较大, 而且还存在正负两种误差, 有可能比较大小时得不到正确的结果。还有班级给出同位素标记的方法,在理论上可行, 但实际操作困难较大, 难度也较大。