大豆蛋白的提取及与含量测定大豆蛋白的提取及与含量测定在此处键入欢迎信息，长短均可。最好包括本站点的内容简介。一、一、目的要求目的要求1.1.学习掌握离心机、学习掌握离心机、752N752N、天平的、天平的使用方法和注意事项；使用方法和注意事项；2.2.学习掌握大豆蛋白的提取及制备丙学习掌握大豆蛋白的提取及制备丙酮干粉的原理和方法；酮干粉的原理和方法；33..学习计算蛋白质收率学习计算蛋白质收率,,测定蛋白测定蛋白质含量质含量二、实验原理（一）1.1.大豆蛋白的等电点为大豆蛋白的等电点为4.5-5.04.5-5.0是酸性蛋白，尽管是酸性蛋白，尽管大豆中含有水溶蛋白、盐溶蛋白、碱溶蛋白和醇溶蛋大豆中含有水溶蛋白、盐溶蛋白、碱溶蛋白和醇溶蛋白，但其主要成分为碱溶蛋白，本实验为节省丙酮用白，但其主要成分为碱溶蛋白，本实验为节省丙酮用量只进行碱提；量只进行碱提；2.2.丙酮（有机溶剂）可降低溶液的介电常数、破坏丙酮（有机溶剂）可降低溶液的介电常数、破坏蛋白质的水化膜，故可使蛋白质在一定条件下沉淀析蛋白质的水化膜，故可使蛋白质在一定条件下沉淀析出；调节蛋白质溶液的出；调节蛋白质溶液的pHpH值到等电点附近，有利于值到等电点附近，有利于蛋白质的沉淀。蛋白质的沉淀。三、试剂、材料及仪器三、试剂、材料及仪器1.1.0.2%0.2%的的NaOHNaOH；；2.6mol/L2.6mol/L的的HClHCl；；3.1mol/L3.1mol/L的的HClHCl4.4.化学纯级丙酮化学纯级丙酮5.5.市售大豆粉市售大豆粉6.6.精密精密pHpH试纸试纸7.7.天平天平8.8.离心机（普通）离心机（普通）9.9.离心内、外套管离心内、外套管10.10.烧杯烧杯11.11.搅拌棒搅拌棒四、实验步骤提取：提取：..称取称取33克大豆粉，用克大豆粉，用0.2%0.2%NaOH30NaOH30毫毫升。（先加入调成糊状，再用少量多次地慢慢升。（先加入调成糊状，再用少量多次地慢慢地加入（边加边搅拌）地加入（边加边搅拌）NaOHNaOH溶液），室温下溶液），室温下搅拌抽提搅拌抽提1515minmin，，于于6000r/min6000r/min离心离心7min,7min,小小心留取上清液，弃脂层和沉淀，如上清液有漂心留取上清液，弃脂层和沉淀，如上清液有漂浮物，再经过滤；浮物，再经过滤；留出上清液留出上清液22毫升稀释毫升稀释5050、、100100倍做含量测定倍做含量测定三、实验步骤制干粉：量上清液的体积，加入等体积在冰箱中预冷制干粉：量上清液的体积，加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，先用的丙酮，先用66mol/Lmol/L的的HClHCl调调pHpH至至6.06.0，再用，再用11mol/Lmol/L的的HClHCl小心调小心调pHpH至至4.5-5.04.5-5.0，于，于40004000r/minr/min离心离心1515minmin，，((留取沉淀物留取沉淀物))，并用少量丙酮反复，并用少量丙酮反复((至少两次至少两次))搅拌洗涤（在离心管中进行），加入丙搅拌洗涤（在离心管中进行），加入丙酮后一定将沉淀搅拌充分，加入丙酮目的使沉淀脱水。酮后一定将沉淀搅拌充分，加入丙酮目的使沉淀脱水。得到白色粉末状的大豆蛋白粉（上清液回收），用干得到白色粉末状的大豆蛋白粉（上清液回收），用干净的滤纸吸干、平铺在表面皿上，放入净的滤纸吸干、平铺在表面皿上，放入4040度烘箱干度烘箱干燥，待整个实验结束后，再称重并计算产率。燥，待整个实验结束后，再称重并计算产率。FolinFolin酚法测定蛋白质含量酚法测定蛋白质含量目的要求目的要求掌握掌握FolinFolin酚法测定蛋白浓度的原理和方法实验原理酚法测定蛋白浓度的原理和方法实验原理蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外吸收，蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲反折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲反应，应，FolinFolin酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和FolinFolin酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需要复杂而昂贵的仪器。要复杂而昂贵的仪器。FolinFolin酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏1001...
