多克隆抗体多克隆抗体(Polyclonalantibody)(Polyclonalantibody)一一..概念概念给动物接种抗原所获得给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物混合物,,它是由多种抗原决定簇刺它是由多种抗原决定簇刺激多株激多株BB细胞增殖分化所产生的细胞增殖分化所产生的,,称为多克隆抗体称为多克隆抗体..二二..多克隆抗体的应用多克隆抗体的应用免疫学检测免疫学检测被动免疫治疗和紧急预防被动免疫治疗和紧急预防三三..存在问题存在问题特异性差特异性差,,用于免疫学检测用于免疫学检测容易出现交叉反应容易出现交叉反应单克隆抗体单克隆抗体(Monoclonalantibody,McAb)(Monoclonalantibody,McAb)一一..概念概念::通过通过BB细胞杂交瘤技术细胞杂交瘤技术,,获得特异性针对某一种获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体..二二.B.B细胞杂交瘤的类型细胞杂交瘤的类型小鼠-小鼠大鼠大鼠--大鼠大鼠小鼠小鼠--人人人人--人人三三....杂交瘤技术的原理杂交瘤技术的原理1.1.亲本细胞的选择亲本细胞的选择小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶酶(HGPRT)(HGPRT)缺陷型缺陷型免疫脾细胞免疫脾细胞经抗原免疫的经抗原免疫的BALB/cBALB/c小鼠小鼠的脾脏的脾脏2.2.细胞融合细胞融合骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞PEGPEG杂交瘤细胞杂交瘤细胞脾细胞脾细胞融合后细胞的类型融合后细胞的类型::未融合的脾细胞未融合的脾细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞未融合的瘤细胞未融合的瘤细胞33杂交瘤细胞的选择性培养杂交瘤细胞的选择性培养DNADNA合成的途径合成的途径：：糖糖++氨基酸氨基酸氨基喋呤氨基喋呤(Aminopterin,A)(Aminopterin,A)TKTK核苷酸核苷酸DNADNA胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷TMPTMP(Thymidine,T)(Thymidine,T)核苷酸前体核苷酸前体次黄嘌呤次黄嘌呤HGPRTHGPRTIMPIMP(Hypoxanthine,H)(Hypoxanthine,H)融合后细胞在融合后细胞在HATHAT培养基中存活情况培养基中存活情况脾细胞（脾细胞（HGPRTHGPRT++,TK,TK++,,不能长期生长）不能长期生长）骨髓瘤细胞（骨髓瘤细胞（HGPRTHGPRT--,TK,TK--，不能生，不能生长）长）杂交瘤细胞（杂交瘤细胞（HGPRTHGPRT++,TK,TK++，能够生，能够生长）长）4.4.杂交瘤细胞的筛选和克隆化杂交瘤细胞的筛选和克隆化筛选：筛选：免疫荧光免疫荧光ELISAELISA等等克隆化：克隆化：有限稀释法有限稀释法单个细胞显微操作法单个细胞显微操作法软琼脂培养法软琼脂培养法5.5.单克隆抗体的生产单克隆抗体的生产体内：体内：BALB/cBALB/c小鼠体内诱发含有单抗小鼠体内诱发含有单抗的的腹水腹水体外：无血清培养基悬浮培养等体外：无血清培养基悬浮培养等6.6.单克隆抗体的纯化单克隆抗体的纯化硫酸铵沉淀法硫酸铵沉淀法离子交换层析离子交换层析AA蛋白蛋白-Sepharose-Sepharose亲和层析亲和层析四四..单克隆抗体的特性单克隆抗体的特性高度均一性：高度均一性：纯度很高的均一性抗体纯度很高的均一性抗体高度专一性：高度专一性：只对抗原分子上某一抗原决定只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应簇起反应大量产生及稳定性：大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖殖之传代之传代五五..单克隆抗体在医学上的应用单克隆抗体在医学上的应用（一）用作诊断试剂（一）用作诊断试剂1.1.检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。2.2.鉴定病原体，准确诊断传染病。鉴定病原体，准确诊断传染病。3.3.用于肿瘤的诊断和分型用于肿瘤的诊断和分型4.4.激素类单抗用于测定体内激素含量，判激素类单抗用于测定体内激素含量，判断内分泌的功能状态断内分泌的功能状态（二）用作研究工具（二）用作研究工具1.1.纯化抗原纯化抗原2.2.分析和探查抗原结构分析和探查抗原结构3.3.分析抗原决定簇分子的功能分析抗原决定簇分子的功能（三）用于疾病的治疗（三）用于疾病的治疗1.1.抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反抗细胞表面...
