w ow enw enpUC18 和 pUC19 质粒图谱 pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank 注册号为 L08752（pUC18）和 X02514（pUC19）。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ （MSC）来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱。 这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。 特征序列区位： pBR322_origin 1471 - 852 Ampicillin 2486 - 1626 lac_promoter 543 - 514 AmpR_promoter 2556 - 2528 M13_pUC_rev_primer 500 - 478 M13_reverse_primer 479 - 461 M13_forward20_primer 379 - 395 M13_pUC_fwd_primer 364 - 386 lacZ_a 398 - 250 pGEX_3_primer 51 - 29 Orf2 2486 - 1626 NOS terminator sequ ence: ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat 设计引物： Forw ard primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC 及三个保护碱基) Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC 及三个保护碱基) 请查一下NOS 终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有，引物合成后，以任何一种pCAMBIA 为模板都能扩增到该终止子序列。 一、质粒的基本特性 1．质粒的复制 通常一个质粒含有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区（整个遗传单位定义为复制子）。在不同的质粒中，复制起始区的组成方式是不同的，有的可决定复制的方式，如滚环复制和 θ 复制。在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于 pMB1 质粒或 ColE1 质粒的复制起始位点。图 3-1 是其复制其始示意图。 在复制时，首先合成前 RNAⅡ ，即前引物，并与 DNA 形成杂交体；而后 RNase H 切割前 RNAⅡ ，使之...
