抗原制备技术VIP免费

抗原制备技术1天然抗原的制备自然条件下，绝大多数抗原都是以混合物的形式存在，极少以单一形式存在，因此必须从复杂的混合物中提取出某种单一成分，纯化后的抗原才可用来制备相应的抗体。一、颗粒性抗原的制备天然的颗粒性抗原包括人和各种动物的细胞抗原以及各种细菌抗原和寄生虫虫体抗原等。（一）绵羊红细胞抗原用于制备抗绵羊红细胞抗体（溶血素）（二）细菌抗原二、可溶性抗原的制备蛋白质（包括糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素）、多糖和核酸等均为可溶性抗原。主要来源于组织和细胞，因此需先将组织和细胞破碎，再用适当的方法提取纯化目的蛋白。（一）组织和细胞可溶性抗原的粗提1、制备组织匀浆2、细胞的破碎（1）超声波破碎法（2）反复冻融法（3）酶处理法（4）表面活性剂处理法（二）可溶性抗原的提纯1、超速离心法2、选择性沉淀法盐析法、聚合物沉淀法、有机溶剂沉淀法、核酸沉淀法3、凝胶过滤法4、离子交换层析法5、亲和层析法（二）纯化抗原的鉴定1、蛋白含量测定紫外光吸收法蛋白含量（mg/ml）=A280×1.45-A260×0.742、分子量测定3、纯度测定SDS-PAGE4、免疫活性测定2重组蛋白质抗原的制备获取天然抗原的问题：1、量小2、纯度低解决方案重组蛋白质抗原程序目的DNA直接合成、cDNA文库钓取重组载体转染/转化诱导表达纯化鉴定3合成肽抗原的制备合成肽抗原的常用方法固相多肽合成技术（solidphasepeptidesysthesis，SPPS）从羧基端向氨基端的方向在固相载体表面依次加入氨基酸残基，每延长一个氨基酸残基需经过去保护、激活和交联的反应步骤，往返循环直到合成完成。合成肽抗原序列较短、免疫性不强一般情况下在免疫动物制备抗体时需要与载体蛋白偶联形成复合抗原钥孔血蓝蛋白（KLH,keyholelimpethemocyanin）是具有高度免疫原性的蛋白大分子，作为载体蛋白用于免疫原的制备，交联于半抗原和其他抗原，增强它们的免疫原性。4佐剂的制备佐剂（adjuvant）是指预先或与抗原一起注射于机体，能够增强机体免疫应答或改变免疫应答类型的物质。佐剂本身可以有免疫原性，也可以没有免疫原性。福氏佐剂（Frenndadjuvant）CompleteFreundadjuvant羊毛脂石蜡油卡介苗（BCG）InCompleteFreundadjuvant羊毛脂石蜡油使用原则：颗粒性抗原一般情况下不需使用；可溶性大分子量的蛋白质免疫原、人工抗原，初次免疫时必须使用佐剂；不连续两次使用完全福氏佐剂，以免导致动物严重反应；