热板法镇痛实验TheanalgesiaexperimentsofhotplatemethodWhatispain?•PAINis"anunpleasantsensoryandemotionalexperienceassociatedwithactualorpotentialtissuedamage,ordescribedintermsofsuchdamage".•疼痛是机体受到损伤时发生的一种不愉快的感觉和情绪性体验.Howtoeasepain?•镇痛药(analgesics)是一类作用于CNS缓解疼痛的药物。1.麻醉性镇痛药:1)阿片生物碱类:吗啡和可待因2)人工合成的镇痛药:哌替啶或度冷丁(pethidineordolantin)、安那度、芬太尼、美散痛、镇痛新等2.非麻醉性镇痛药:罗通定(rotundine)•如何设计实验比较和观察麻醉性镇痛药Dolantin和非麻醉性镇痛药Rotundine的镇痛效应?•理论:Dolantin和Rotundine的药理作用及机制?•镇痛实验实验设计(ExperimentDesign)镇痛实验•热板法:将小鼠置于一定温度的热板上,热刺激小鼠足部产生痛反应,即舔足反应。以小鼠出现舔足的时间作用为痛反应指标,判断药物是否具有镇痛作用。•化学刺激法(扭体法):化学刺激物注入小鼠腹腔内,引起深部的大面积而较久的疼痛刺激,致使小鼠产生扭体反应(腹部收缩成“S”形,躯干与后腿伸张、臀部高起及蠕行等)。目的(Objective)1.掌握镇痛药的实验法。2.观察麻醉性镇痛药度冷丁(Dolantin)和非麻醉性镇痛药罗通定(Rotundine)的镇痛效应。Dolantin作用于中枢神经系统的阿片受体,抑制神经末梢释放P物质,阻断神经冲动传递。镇痛效力比吗啡弱,时间短,成瘾性轻。Rotundine阻断脑内DA受体,促进脑啡肽、内啡肽的释放。镇痛作用比度冷丁弱,但无成瘾性。1.材料(Materials)1.1动物:20~25克小鼠,雌性。1.2器材:热板(hotplate)(数控超级恒温槽,金属罐)。1.3药品:0.25%dolantin,0.25%rotundinesulfate,0.9%NaCl。1.实验材料(materials)1.1动物雌性体重20~25g小鼠(mouse):类别外生殖器与肛门之间雄性距离长,有毛生长,无纵行沟雌性距离短,无毛生长,能见到一条纵行沟小鼠捉拿•右手抓鼠尾鼠尾略向后拉左手的拇指和食指抓住小鼠两耳后项背部皮毛以无名指及小指夹住鼠尾左手翻转使鼠腹部朝上,头略朝下。小鼠腹腔注射右手持注射器45度角刺入腹白线偏左的下腹部,进针3mm左右有落空感时表示已进入腹腔,回抽无肠液、尿液(有空气)即可注射(注意:切误使针头向上注射,以防针头刺伤内脏)*取药时略多,针头向上赶去气泡后多余药品放回原瓶2.1热板温度:调节温度水浴恒定于55±0.1℃(已调好)2.2预选动物:筛选10-30秒内有舔后足反应合格小鼠3只(对逃避、跳跃者弃之)。有舔足反应1次立即取出,防止烫伤。并各测定正常痛阈值一次。2名同学紧密配合,秒表使用。2.3实验分组(苦味酸标记):甲鼠腹腔注射0.25%度冷丁0.1mL/10g(头部标记)乙鼠腹腔注射0.25%罗通定0.1mL/10g(背部标记)丙鼠腹腔注射生理盐水0.1mL/10g(尾部标记)2.方法(Methods)称体重2.4测痛阈值(painthreshold):分别在注射药后0min、15min、30min、60min各测痛阈值一次,并记录痛阈值。2.6痛阈提高百分率按下式计算痛阈提高百分率痛阈提高百分率=用药后平均热痛阈值—用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值×100%2.5数据统计数据以x±s表示,显著性差异采用t检验。2.方法(Methods)跳跃?3.结果(Results)表1罗通定、度冷丁对小鼠痛阈的影响*合并全班数据,计算x±s,显著性差异采用t检验,算P值。样本生理盐水痛阈值(秒)度冷丁痛阈值(秒)罗通定痛阈值(秒)015min30min60min015min30min60min015min30min60min123456789x±s痛阈提高百分率(%)///图⒈度冷丁和罗通定药物对小鼠热痛阈值的影响*p<0.05,**p<0.01,vscontrolgroup#p<0.05,##p<0.01,vsrotundinegroup************00.20.40.60.811.21.41.615min30min60min时间(min)痛阈提高百分率(%)controldolantinrotundine4.讨论(Discussion)分析比较dolantin与rotundine的作用强度,讨论dolantin、rotundine的作用机制。【实验报告要求】•1.题目。•2.署名作者和合作者姓名及单位。•3.结构式摘要(目的,方法,结果,结论)。•4.材料和方法主要实验材料,实验数据记录条件,观察指标,数据用x±s表示,统计方法。•5....