细胞培养与细胞转染 目的 学习细胞培养的基本方法 掌握磷酸钙法转染细胞的原理及操作步骤 体外细胞培养技术 细胞培养（cell culture）：是指从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。 细胞分类：贴壁细胞和悬浮细胞 优点：离体条件下观察细胞生命活动规律，不受体内环境影响可人为改变条件，进一步观察生理功能的改变。 原代培养（primary culture）： 直接取材于有机体组织的细胞进行培养 传代培养（secondary culture）： 把原代培养的细胞从培养瓶中取出进行培养 细胞体外培养所需的一般条件： 适宜的培养皿 血清成分 37℃ 5％CO2 95～100％湿度 抗生素 细胞系（cell line）： 在细胞培养中产生了具有无限增殖能力的变种细胞，这种细胞可被无限的传代。 常见的细胞系： NIH3T3 细胞系：1963 年取自小鼠胚胎细胞建立 Hela细胞系：1952 年取自人宫颈癌细胞建立 细胞培养基本技术 培养用品的清洗和消毒 无菌操作 培养用液的配制 组织取材和分离 细 胞 培 养 与 细 胞 转 染 --第 1页细 胞 培 养 与 细 胞 转 染 --第 1页细 胞 传 代 培 养 培 养 用 品 的 清 洗 和 消 毒 1.清 洗 ： 浸 泡 ， 刷 洗 ， 清 洁 液 浸 泡 ， 冲 洗 2 包 装 3 培 养 用 品 的 消 毒 灭 菌 干 热 消 毒 湿 热 消 毒 紫 外 线 消 毒 过 滤 除 菌 消 毒 消 毒 剂 和 抗 生 素 一 次 性 用 品 无 菌 操 作 （ 一 ） 清 点 培 养 物 品 和 用 具 （ 二 ） 操 作 野 消 毒 ， 紫 外 线 灯 30 分 （ 三 ） 洗 手 和 着 装 （ 四 ） 培 养 过 程 中 的 操 作 酒 精 灯 的 使 用 ， 物 品 的 摆 放 （ 五 ） 操 作 后 台 面 的 清 洁 和 复 位 培 养 用 液 水 和 平 衡 盐 溶 液 天 然 培 养 基 合 成 培 养 基 水 和 平 衡 盐 溶 液 超 纯 水 和 三 蒸 水 ， 双 蒸 水 只 能 用 于 清 洗 平 衡 盐 溶 液 ： 配 制 培 养 液 ， 洗 涤 组 织 和 细 胞 Hanks, D-Hanks, PBS,HEPES 等 天 然 培 养 基 血 清 ， 水 解 乳 蛋 白 和 胶 原 血 清 ： 小 牛 血 清 ， 胎 牛 血 清 ， 马 血 清 ， ...
