- 1 - 实验九 植物单细胞分离技术（理论） 一、植物细胞培养概述 指以单细胞（single cell）或细胞团（cell aggregate）为单位进行的植物组织培养方式。 1、技术特点： ◆操作简单 ◆试验重复性好 ◆单次实验群体大 2、培养的植物细胞的特点 A、培养时生长速度慢 B、直径为20 ~ 150um，比细菌大 C、纤维素细胞壁非常脆弱 D、生理与代谢活性低 E、需求营养成分复杂 F、不易于保存 G、次生物质的合成与积累和细胞分化过程有关 3、细胞培养液的性质 ◆培养液具有一定的黏度 ◆提供细胞生长发育所需的营养 ◆黏度随细胞浓度的增加而增大 ◆需不停搅拌而进行通气 二、植物细胞悬浮培养 （一）悬浮细胞培养的优点 - 2 - A、提供大量的均匀的植物细胞 B、细胞增殖速度比愈伤组织快 C、适宜大规模培养 D、增加培养细胞与培养液的接触面，改善营养供应 E、避免有害物质的过分积累 F、保证氧的充分供给 （二）悬浮培养细胞的建立与测定 1、诱导建立 诱导细胞悬浮培养的方法 A、选择一块易破碎的愈伤组织，转移到适合的培养液中，经 1~2 个周期振荡培养，得到呈分散状的细胞培养物。 B、选择有用的培养材料，进行匀浆处理，过滤，转入液体培养基中培养。 C、选择有用的材料多次转移与液体振荡培养，得到分散程度高的细胞。 悬浮培养的材料： 愈伤组织的疏松程度、分散效果的好坏。 2、生长与增殖 - 3 - 扩增曲线： ◆S 形 ◆延迟期、对数生长期、平台期、衰减期 悬浮培养细胞起始浓度： ◆一般在 0.5 × 105~2.5 × 105 个/ml ◆悬浮培养的单个细胞，3~5d可见分裂状况 3、悬浮培养物的保持 A、培养瓶 ◆100ml 或 250ml 的三角瓶作容器 ◆装 20ml 或 50ml 的培养液 B、振荡培养装置 ◆旋转式摇床 ◆转速控制在 120r/min 以下 ◆体积不宜过大，温度可调 C、继代培养 ◆定期继代培养，最适周期为 1~2 周◆继代时间为 1 周的可用 1：4的接种量 ◆继代时间为 2 周的可用 1：10 的接种量◆移液管口径可稍大，易吸取细胞 - 4 - ◆接种前后要用酒精灯灼烧瓶口◆定期检查是否有微生物污染 4、生长测定 ◆对任何一建立细胞系都应进行生长动态测定 ◆不同培养基及不同条件，细胞的最大生长速率可由细胞数、细胞干重或细胞蛋白的对数对培养时间作坐标而测定 ◆临界起始浓度：低于此值，细胞无法生长，略高于此值，则延迟期伸长 §常用的生长测定方法 A、细胞计...
