MEDICALREPORT原位杂交与免疫组化免疫组化的概念免疫组化的步骤免疫组化的应用PART01PART02PART03主要内容一、免疫组化二、原位杂交原位杂交PART041原理抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。免疫组化的概念一、免疫组化21.染色方法2.石蜡组织切片的制备3.免疫组化染色（石蜡切片）免疫组化的步骤染色方法3.非标记Ab桥法桥法是霉标记抗体的改进，经过三次抗体，其二抗为未标记桥抗体。EARLYGOAL2.间接法荧光素，霉标记在二抗上（二抗：抗产生一抗动物的LgG抗体）。4.ABC法（亲和素—生物素—过氧化物霉复合法）等等1.直接法用标记物（荧光素、霉素）直接标记在一抗上，标记抗体与抗原结合。再通过显色或者荧光激发后在显微镜下观察3.脱水：固定后的组织内进行脱水，以便石蜡的浸入。脱水用梯度酒精进行脱水（自动脱水机）4.浸蜡与包埋：组织放置刚过熔点的石蜡中，然后进行包埋，将透明后浸了蜡的组织块放到盛有熔化石蜡的模块中，并使之凝固成蜡块。（包埋机）1.取材：从动物或者患者取下组织材料。2.固定：将所需的材料进行固定，使得组织内蛋白质迅速凝固液（甲醛）细胞内结构和成分不再发生改变。5.切片与贴片：(组织切片机)（1）切片（2）展片（3）贴片石蜡组织切片的制备3.灭活内源性过氧化物酶5.封闭10.常规梯度酒精脱水，透明，干燥，封片。免疫组化染色(石蜡切片)1.考片65摄氏度1-2h4.抗原修复2.常规二甲笨脱蜡，和梯度酒精水化8.显色9.苏木素复染7.加入有标记的二抗6.一抗过夜3在科研中的应用免疫组化应用在科研研究某个基因与疾病的发生（肿瘤）临床分期，预后，患者生存率等的相关性。最终的目的是考察这个基因的临床意义。在科研中的应用4基本原理分类荧光原位杂交类型探针实验步骤实验流程具体实例原位杂交二、原位杂交1.核酸分子杂交的基本原理是利用核酸分子（DNA，RNA）的碱基对形成氢键的互补性（A=T,A=U,C=G），用一标记的2.核算探针去检测与之碱基互补的靶核酸免疫学中抗原—抗体的反应基本原理2.细胞1.组织3.染色体分类2.荧光原位杂交1.基因组原位杂交3.多色荧光原位杂交荧光原位杂交类型基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩瀚的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA探针2.探针的制备4.样本的预处理8.结果分析实验步骤1.FISH样本的制备3.探针标记7.荧光显微镜检测6.染色体显带5.杂交4.样本的预处理7.荧光显微镜检测实验步骤1.FISH样本的制备2.探针的制备5.杂交3.探针标记6.染色体显带具体实例.年中总结报告BUSINESSREPORTTHANKS
