中和抗体测定VIP免费

中和抗体试验2008-12-15SDEPIe-mail:liyan7516@163.comTel:0531-82679697病毒分离技术（四）——中和抗体测定待检血清稀释（14∶～11024∶）每份待检血清的稀释在Ⅰ型板的第1排进行。0.15ml稀释液，加入0.05ml的血清，吹吸均匀后，将这个稀释度的血清向下一个稀释度移0.05ml，至最高稀释孔吹吸均匀后，弃去0.05ml。（在微量板上进行，板子标记和稀释详见附录1）Ⅰ型板血清1血清2血清3血清4血清对照1∶4○○○○○○○○血清稀释1∶4○○○○○○○○1∶16◎○◎○◎○◎○1∶64◎○◎○◎○◎○1∶256◎○◎○◎○◎○1∶1024◎○◎○◎○◎○血清对照1∶4○○○○○○○○血清稀释1∶4○○○○○○○○1∶16◎○◎○◎○◎○1∶64◎○◎○◎○◎○1∶256◎○◎○◎○◎○1∶1024◎○◎○◎○◎○血清5血清6血清7血清8病毒分离技术（四）——中和抗体测定稀释度1：41：161：641：2561：1024稀释液0.150.150.150.150.15血清0.05→0.05→0.05→0.05→0.05废0.05移入它孔（每孔×5）0.0250.0250.0250.025待检血清稀释方法示例：病毒分离技术（四）——中和抗体测定待检血清稀释用排枪向第2排孔及Ⅱ、Ⅲ型板的相应稀释度的两排孔中，每孔移入0.025ml，原稀释孔保留0.025ml。标准血清稀释（根据血清效价而定）•standardserum:18000Ⅰ∶•standardserum:12000Ⅱ∶•standardserum:12000Ⅲ∶病毒分离技术（四）——中和抗体测定标准毒株稀释（200CCID50/0.025ml）（病毒滴定及攻击病毒含量的计算与稀释见附录2、3）中和试验时所用抗原量过大或过小都会影响血清抗体滴度。每次试验应设病毒对照，核对所用病毒剂量，一般应在32～320CCID50/0.025ml的用量时其结果才被认可。（病毒滴定对照见附录4）病毒分离技术（四）——中和抗体测定中和作用，向血清板上加入已稀释好的标准毒株悬液0.025ml（200CCID50）。（注意型别的区分和对应）轻摇混匀后，放入CO2孵箱，培养2～4小时加入事先准备好的细胞悬液0.1ml/孔Hep-2:5～10×104/ml再次摇匀，密封好放在36.5℃培养5～7天。病毒分离技术（四）——中和抗体测定对照的设立血清对照（14∶），标准血清和待检血清同时设立细胞对照、稀释液对照100CCID50的抗原对照每个对照设两孔，血清、抗原的量各为0.025ml/孔，补加稀释液0.025ml/孔，细胞对照孔的稀释液应为0.05ml，然后全部加细胞悬液0.1ml/孔，密封后放34.5℃培养5～7天。病毒分离技术（四）——中和抗体测定结果判定当100CCID50的抗原对照出现完全病变时，判定最终结果当最高稀释度的血清病毒混合液接种的2孔细胞中有1孔不出现CPE，该稀释度的倒数即为该血清标本的中和抗体滴度。Ⅰ型板血清1血清2血清3血清4血清对照1∶4○○○○◎◎○○血清稀释1∶4○○○○◎◎○○1∶16○○○○○◎○○1∶64○○○○○○○●1∶256●●○●●●●●1∶1024●●●●●●●●血清对照1∶4○○○○○○○○血清稀释1∶4○○○○●●●○1∶16○○○○●●●●1∶64○○○○●●●●1∶256○○●○●●●●1∶1024○○●○●●●●血清5血清6血清7血清8病毒分离技术（四）——中和抗体测定CCID50100●●●●●●●●SabineⅠ10●●●●●●●●1●●●●●●●●0.1●◎◎●◎◎◎◎100●●●●●●●●SabineⅡ10●●◎●●◎●●1◎◎●◎●◎◎◎0.1◎◎◎◎◎◎◎◎100●●●●●●●●SabineⅢ10●●●●●●●●1●◎●◎●◎◎●0.1◎◎◎◎◎◎◎◎病毒滴定结果判断示意图100＝1病毒分离技术（四）——中和抗体测定Spearsman—Karber公式：LogCCID50=Xm＋1/2d－d（Pi/100）Xm=所用病毒最低稀释度（最高浓度）的对数d=稀释度系数（倍数）的对数。∑Pi=各稀释度出现CPE百分数的总和。病毒分离技术（四）——中和抗体测定病毒滴定结果的判定SabineⅠ：LogCCID50=0+0.5-1×（100+100+100+25）/100=-2.75SabineⅡ：LogCCID50=0+0.5-1×（100+75+25）/100=-1.50SabineⅢ：LogCCID50=0+0.5-1×（100+100+50）/100=-2.00病毒分离技术（四）——中和抗体测定病毒滴定对照结果的判断SabineⅠ：取2.75的反对数，即得到攻击病毒的含量：562CC...