许多蛋白质都具有手性识别功能，可以作为手性HPLC 柱的基质。卵类粘蛋白（分子量 28,000）在对映异构体的分辨方面显示了特殊能力。通过与 N,N1琥珀酰氨基碳酸酯反应，将这种蛋白固定在孔径120Å 的 5 µm 的氨基丙基硅烷化硅胶颗粒上，填充成Ultron ES-OVM 色谱柱。这种共价键合的卵类粘蛋白对各种酸性、碱性和中性化合物的手性分离非常有用[1— 10]。本技术概要介绍了 Ultron ES-OVM 柱的一些色谱性质，包括优化手性分离方法开发的实用要点。还包含了各种应用实例，说明这种 HPLC 柱能够分离许多不同结构的对映异构体。Ultron ES-OVM 柱 ： 一 种 用 于 手 性 化 合 物HPLC分 离 的 键 合 卵 类 粘 蛋 白 色 谱 柱技术概要流 动 相 pH 对 保 留 和 对 映 体 选 择 性 的 影 响卵类粘蛋白的等电点是 3.8 到 4.3。因此，流动相pH 在卵类粘蛋白的等电点以上或以下时，UltronES-OVM 填料分别带负电荷或正电荷。实验结果表明，在对映异构体化合物的分离中，流动相的 pH 对保留和选择性有显著影响。用以下化合物考察流动相 pH 对第一个对映体峰容量因子 (k'1) 和对映体选择性 (α) 的影响：酸性化合物，异丙酚 (pKa = 4.4)、中性化合物环己烯巴比妥（在 pH 3.0 到 6.0 范围内呈中性）；以及碱性化合物，扑尔敏 (pKa = 4.0, 9.2)。这些化合物的结构如图 1 所示。CHCH2CHCOOHCH3H3CH3CCHCH2CHCH3H3CH3CCOO_p Ka = 4.4 եCH3CH3p Ka = 4.0 CNHCH2CH2NHH++ClCH3CH3p Ka = 9.2 CNCH2CH2NHH+ClCH3CH3CNCH2CH2NHClCH3H3CO_NHONOOCH3H3CNONOp Ka = 8.2 әԲ图 1.异 丙 酚 、 扑 尔 敏 和 环 己 烯 巴 比 妥 的 酸 碱 平 衡2当流动相为 20 mM 磷酸盐缓冲液/乙醇 (100/5) 时，在pH 3.0到6.0范围内，第一个对映体峰的 k'1 和各所测外消旋化合物的分离因子 (α = k'2/k'1) 分别见图 2 和图 3。卵类粘蛋白在 pH 3.0 条件下带正电，在 pH 4.0 到 4.6 范围内为中性，在 pH5.5 条件下带负电。由图 2 可见，不带电荷的环己烯巴比妥在 pH3.0 到 6.0 的范围内，保留基本不变。该化合物第一个洗脱的对映体的 k'1 值略大约零，这可能是源于与固定的卵类粘蛋白之间的弱疏水相互作用。异丙酚，在 pH 4.0 到 4.6 范围内，值最大，如图 2所示。异丙酚的 pKa 为 4.4，在这一 pH 范围内卵类...
