荧光定量荧光定量PCRPCR检测项目检测项目HBV-DNAHBV-DNA定量定量乙肝基因分型乙肝基因分型乙肝拉米夫定耐药乙肝拉米夫定耐药HCV-RNAHCV-RNA定量定量病毒性脑炎病毒性脑炎实时荧光定量PCR方法------TaqMan法方法：方法：TaqMan法TaqMan---水解型杂交探针与目标序列互补5′端标记有荧光报告基团(Reporter,R)，如FAM、VIC等3′端标记有荧光淬灭基团(Quencher,Q)探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收，无荧光，R与Q分开，发荧光Taq酶有5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针5’3’5’5’3’5’ForwardPrimerReversePrimerTaqMan®ProbeRQTaqman实时PCR的反应过程Taqman实时PCR的反应过程DisplacementDisplacement5’3’5’5’3’5’ForwardPrimerReversePrimerRQHydrolysisHydrolysis5’3’5’5’3’5’QRPolymerizationCompletedPolymerizationCompleted5’3’5’5’3’5’RQ每扩增一条DNA分子，释放一个荧光信号，可以在循环过程中任一点检测荧光实时荧光定量PCR定义在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法实时荧光定量PCR原理实时原理•常规PCR技术：•对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析•无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测•实时定量PCR技术：•利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析实时荧光定量PCR原理定量原理如何对起始模板定量
通过Ct值和标准曲线对起始模板进
