准备工作： 1、进入细胞室前，首先用 75%酒精擦试工作台，接着紫外灭菌30-50min，过后，关闭紫外灯，通风 10min
2、从冰箱中取出胰酶、PBS 缓冲液、培养基 注意事项： 1、所有实验用的器械，仪器灭菌，消毒，烘干
2、打开溶剂，培养瓶瓶盖时，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下
3、用完溶剂，培养瓶时，瓶口及瓶盖也要在酒精灯上烤一下
开始工作： 1、实验前换衣帽，开风淋，吹风
2、75%乙醇擦手，然后用 75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯
3、取待用的细胞，旋紧瓶盖
4、弃去旧的培养液，把培养瓶放回原处
5、取移液管一支，塞棉花端，及管身，均在酒精灯上烤一下，套好吸球
6、用移液管加入适量的 PBS 缓冲液，缓慢荡洗一下细胞，然后将 PBS缓冲液弃掉
7、用移液管（微量枪）吸取适量胰酶约 2ml（所用胰酶的量），弃掉枪头
8、将细胞置于 5%CO2、37 度培养箱中 1min-2min，目的：提高酶活性，促进消化
9、取待用细胞，取移液管一支，塞棉花端，及管身，均在酒精灯上烤一下，套好吸球
10、用移液管加入适量的完全培养液冲洗（吹散细胞）细胞，将瓶底粘着的细胞吹散下来，再将细胞悬液移入的离心管中，封口，标签
11、离心 5min，1000 转/min
以下分别介绍： 一 换液 1、取待用的细胞，旋紧瓶盖
2、弃去旧的培养液，把培养瓶放回原处
3、取移液管一支，塞棉花端，及管身，均在酒精灯上烤一下，套好吸球
4、用移液管加入适量的 PBS 缓冲液，缓慢荡洗一下细胞，然后将 PBS缓冲液弃掉
5、取移液管一支，塞棉花端，及管身，均在酒精灯上烤一下，套好吸球
6、用移液管加入适量的细胞培养液于培养瓶中
7、将细胞置于 5%CO2、37 度培养箱培养
二 传代 1、细胞离心毕，拆封，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液，吸取已配制的
