细胞培养传代冻存复苏操作规程(自编)VIP免费

细 胞 培 养 程 序 材 料 A、 仪 器 1. 净 化 工 作 台 ， 2. 离 心 机 ， 3. 恒 温 水 浴 箱 ， 4. 冰 箱 （ 4℃ ） 5. 倒 置 相 差 显 微 镜 ， 6. CO2培 养 箱 ， 7. 振 荡 混 合 仪 8. 酶 联 免 疫 检 测 仪 ， 9. 移 液 枪 ， 10. 电 磁 力 搅 拌 机 ， 11. 微 孔 滤 器 B、 玻 璃 器 皿 1. 吸 管 ， 2. 小 烧 杯 （ 100ml） ， 3. 废 液 缸 ， C、 塑 料 器 皿 1. 吸 头 ， 2. 枪 头 ， 3. 96孔 培 养 板 ， 4. 15ml离 心 管 ， 5. 50ml离 心 管 ， 6. 胶 塞 ， D、 其 他 物 品 1. 微 量 加 样 枪 ， 2. 红 血 球 计 数 板 ， F、 试 剂 1. D-Hanks液 ， 2. 小 牛 血 清 ， 3. RPMI1640， 4. 双 抗 （ 青 霉 素 、 链 霉 素 ） ， 5. 0.25%胰 酶 ， 6.0.025% EDTA 7. 二 甲 基 亚 砜 （ DMSO） ， 8. MTT溶 液 ： 称 取 250mgMTT， 放 入 小 烧 杯 中 ， 加 50ml培 养 液 或 平 衡 盐 溶 液 在 电磁 力 搅 拌 机 上 搅 拌30min， 用 0.22um的 微 孔 滤 器 除 菌 ， 分 装 ， 4℃ 保 存 备 用 ， 两周 内 有 效 。 一 、 原代细 胞 培 养 或 细 胞 株（ 系） 复苏培 养 ： （ 一 ） 细 胞 原代培 养 1.贴壁细 胞 培 养 法： 1）、 组织块培 养 法 将所取 得的 组织用 含青 霉 素 、 链 霉 素 400U/ml和400ug/ml的 生理盐 水 漂洗2此，5分 钟/次。 取 出组织尽可能的 取 出液 滴， 置 青 霉 素 小 瓶中 ， 加 两 滴小 牛 血 清 ，用 剪刀尽可能将其 剪碎， 用 吸 管 将其 泥状的 组织点种在 培 养 瓶壁， 倒 置 于37°、5%CO2条件下 30分 钟后将培 养 瓶正置 ， 从培 养 瓶的 一 端缓缓加 入 完全培 养 液 （ 小牛血清15%、青霉素、链霉素各100U、100ug/ml），使组织块有培养液与其接触为准，轻轻放置于37°培养。待 24小时候补液。 或小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在 37℃温箱内。 培养2~4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而...