【细胞培养】 一、细胞的复苏： 非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中，需要培养时要先从液氮中取出使之复苏
细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在－196℃液氮中的细胞快速融化至 37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害
具体操作如下： 1、实验前准备： 1
1、将水浴锅预热至 37℃，并将含 10%FBS 的培养液置于其中预热；
2、用 75％酒精擦拭紫外线照射 30min 的超净工作台台面
3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等
2、取出冻存管及迅速解冻： 2
1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号
2、从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号
3、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，约1-2min 后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内
3、平衡离心 将细胞悬液吸到离心管中，1000～1500rpm 离心 3 分钟； 4、制备细胞悬液 吸去上清液，加入 10 ml 培养液，用吸管轻轻吹打均匀 ，使细胞悬浮 ； 5、细胞计 数 细胞浓 度 以 5×105/ml 为 宜
6、培养细胞 将复合 细胞计 数 要求 的细胞悬液吸到培养瓶中，将培养瓶放入37℃和 5％CO2 的培养箱 内培养（ 略 微 拧 松 培养瓶盖 ） ，换 液的时间 由 细胞情 况 而 定
通 常 ，除 少 数 特 别 注 明 对 DMSO 敏 感 的细胞外， 绝 大 部 分细胞株 （ 包 括 悬浮 性 细胞） ， 在解冻之后， 可 直 接 放入含有 10-15ml（ 5－10 倍 ） 新 鲜 培养基 的培养角 瓶中， 待 隔 天 再置换 新 鲜 培养基 以 去除 DMSO 即 可 ， 如此 可避免大
