转染和转化 转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”
其中,核酸包括 DNA(质粒和线性双链 DNA),反义寡核苷酸及 RNAi(RNA interference)
基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内
早期的磷酸钙转染法转染效率很低,且对很多细胞株无效,因此不能满足很多科研工作的需要
目前,最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物,它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征,容易透过细胞膜
其中,阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率,然而在体内,它迅速被血清清除,在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,这将导致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其应用
由于阳离子脂质体的局限性,阳离子聚合物转染试剂日益受到重视
转化特指将质粒 DNA 或以其为载体构建的重组 DNA 导入细菌体内,使之获得新的遗传特性的一种方法
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一
受体细胞经过一些特殊方法(如:电击法,CaCl2 等化学试剂法)处理后,使细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源 DNA 分子通过的感受态细胞
进入细胞的DNA 分子通过复制、表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状
由外来 DNA 引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)
噬菌体常常可感染细菌并将其 DNA 注入细菌体内,也可引起细菌遗传性状的改变
通过感染方式将外来 DNA引入宿主细胞,并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)
转染是转化的一种特殊形式
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程
载体:能在连接酶