此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除精品文档Lipo2000 瞬时转染细胞步骤Stealth? RNAi or siRNA Transfection 以 24 孔板为例，其余规格的转染见表1 1 中板，细胞密度为 30-50%适宜 。注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。2 第二天（ 24-36 小时后）每个孔转染方式如下：A 将 20pmol siRNA 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中。B 将 1ul lipo2000溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置5min。C 将 A B 两管混合，放置 20min。3 转染期间，将 24 孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul 。将 C 管 mix 加入 24 孔板对应孔中， 4-6 小时候换成有血清培养基。Plasmid DNA Transfection DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1 中板。贴壁细胞： 0.5-2X105 cells/well，第二天待细胞密度达到70-80%时转染悬浮细胞： 4-8X105 cells/well，中板后随即转染。2 转染。A 将 0.8ug DNA 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中。B 将 2ul lipo2000溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置5min。C 将 A B 两管混合，放置 20min。转染期间，将 24 孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul 。将 C 管 mix 加入24 孔板对应孔中， 4-6 小时候换成有血清培养基。此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除精品文档Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection 中板密度 * Culture vessel Surf. area per well Vol. of plating medium Vol. of dilution medium DNA Lipofectamine ?2000 RNA Lipofec tamine ?2000 1000-10000 cell/well 96-well 0.3cm2 100ul 2X25ul 0.2ug 0.5ul 5pmol 0.25ul 0.5-2X105 cell/well 24-well 2cm2 500ul 2X50ul 0.8ug 2.0ul 20pmol 1.0ul 1-3X105 cell/well 12-well 4cm2 1ml 2X100ul 1.6ug 4.0ul 40pmol 2.0ul 2-3X105 cell/well 6-well (35mm) 10cm2 2ml 2X250ul 4.0ug** 10ul 100pmol 5ul 8-10X105 cell/dish 60mm 20cm2 4ml 2X0.5ml 8.0ug*** 20ul 200pmol 10ul 2-3X106 cell/dish 10cm 60cm2 15ml 2X1.5ml 24ug 60ul 60...
