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医学免疫学实验课件溶血实验VIP免费

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实验内容实验三补体参与的溶血反应实验四免疫血清的制备1.掌握补体溶血反应原理。2.熟悉溶血反应操作、结果观察,免疫血清制备原理,操作过程及应用。3.了解补体CH50的测定。目的要求实验三补体参与的溶血反应实验三补体参与的溶血反应【原理】山羊红细胞抗原与其相应抗体(溶血素)结合后,通过经典途径激活补体,产生膜攻击作用,最后导致红细胞溶解,发生溶血反应。Ag+Ab补体活化裂解经典激活途径原理原理::1.1.2%2%绵羊红细胞绵羊红细胞2.2.溶血素溶血素3.3.补体:豚鼠血清补体:豚鼠血清4.4.NSNS5.5.试管、吸管、水浴箱等。试管、吸管、水浴箱等。材料:材料:2.37℃水浴30min,判定结果。1.取试管四支,编号,按下表加入各物。方法方法((两人一组两人一组))0.250.50.50.751.管内液体透明呈红色为溶血。2.管内液体浑浊呈浅红色为不溶血。3.根据所学知识分析各管结果出现的原因完全溶血不溶血结果:结果:实验四免疫血清的制备实验四免疫血清的制备【原理】将适当的抗原物质注入动物体内,经过一定时间,动物血清中可出现大量特异性抗体,这种含抗体的血清称为免疫血清(多克隆抗体)。优质免疫血清的产生,主要取决于抗原的纯度和免疫原性,以及动物应答的能力。此外,尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物。多克隆抗体多克隆抗体(polyclonal(polyclonalantibody,pcAb)antibody,pcAb)免疫血清的制备流程免疫血清的制备流程一、免疫动物的选择二、免疫程序三、动物采血法四、抗血清的鉴定五、抗血清的纯化、保存抗原来源与动物种属的关系种属差异越远,免疫原性越强动物个体的选择适龄、健康、体重符合要求抗原的性质一、免疫动物的选择一、免疫动物的选择免疫原的剂量免疫间隔时间免疫途径皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结二、免疫程序二、免疫程序颈动脉采血法家兔、绵羊、山羊心脏采血法家兔、豚鼠、大鼠、鸡静脉采血法家兔、山羊、绵羊三、动物采血法三、动物采血法抗体特异性的鉴定双向免疫扩散法抗体效价的鉴定凝集试验、双向免疫扩散试验抗体亲合力的鉴定抗体纯度的鉴定四、抗血清的鉴定四、抗血清的鉴定五、抗血清的纯化、保存五、抗血清的纯化、保存纯化目的是除去这些不相关成分,防止抗血清中其他杂抗体干扰试验结果。2℃~8℃保存:短期保存冰冻保存:保存5年真空干燥保存:保存5~10年例:兔抗羊红细胞抗血清(溶血素)的制备日期(天)第1天第3天第5天第7天第12天第15天途径皮内皮内皮内皮内静脉静脉抗原全血全血全血全血20%悬液20%悬液剂量(ml)0.51.01.52.01.02.0材料:材料:1.1.动物家兔、绵羊。动物家兔、绵羊。2.2.试剂试剂Alsever’sAlsever’s液、生理盐水、佐液、生理盐水、佐剂。剂。3.3.器材注射器、碘酒、酒精、毛细滴器材注射器、碘酒、酒精、毛细滴管。管。常用免疫接种技术常用免疫接种技术1.1.皮内接种皮内接种2.2.皮下接种皮下接种3.3.腹腔接种腹腔接种4.4.耳缘静脉接种耳缘静脉接种5.5.肌肉注射肌肉注射1.1.皮内接种皮内接种将小量药液注入表皮与真皮之间的方法。目的(1)用于各种药物过敏试验,以观察局部反应;(2)预防接种。部位:后背及大腿外侧方操作方法(1)消毒皮肤待干,左手绷紧皮肤,右手持注射器,使针头斜面向上,和皮肤呈5度至15度刺入皮内。(2)待针头斜面进入皮内后,放平注射器,注入药液0.1ml,药量要准确,使局部形成一圆形隆起的皮丘,皮肤变白,毛孔变大。(3)注射完毕,迅速拔出针头,切勿按揉。1.1.皮内接种皮内接种2.2.皮下接种皮下接种将小量药液注入皮下组织的方法。目的(1)需迅速达到药效、不宜经口服给药时采用;(2)预防接种。部位:后背及大腿外侧方操作方法(1)消毒皮肤待干,左手绷紧皮肤,右手持注射器,食指固定针栓,针头斜面向上和皮肤呈30度到40度角,迅速刺入针头的三分之二,放开左手固定针栓,抽吸无回血,即可推注药液。(2)注射完毕,消毒棉签轻按针刺处,快速拔针。2.2.皮下接种皮下接种各种注射的进针深度各种注射的进针深度1.补体参与的溶血反应(操作,2人/组)2.免疫血清的制备与鉴定(操作,6人/组)材料分配材料分配

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