医学免疫学实验课件溶血实验VIP免费

实验内容实验三补体参与的溶血反应实验四免疫血清的制备1.掌握补体溶血反应原理。2.熟悉溶血反应操作、结果观察,免疫血清制备原理,操作过程及应用。3.了解补体CH50的测定。目的要求实验三补体参与的溶血反应实验三补体参与的溶血反应【原理】山羊红细胞抗原与其相应抗体（溶血素）结合后，通过经典途径激活补体，产生膜攻击作用，最后导致红细胞溶解，发生溶血反应。Ag+Ab补体活化裂解经典激活途径原理原理::1.1.2%2%绵羊红细胞绵羊红细胞2.2.溶血素溶血素3.3.补体：豚鼠血清补体：豚鼠血清4.4.NSNS5.5.试管、吸管、水浴箱等。试管、吸管、水浴箱等。材料：材料：2.37℃水浴30min，判定结果。1.取试管四支，编号，按下表加入各物。方法方法((两人一组两人一组))0.250.50.50.751.管内液体透明呈红色为溶血。2.管内液体浑浊呈浅红色为不溶血。3.根据所学知识分析各管结果出现的原因完全溶血不溶血结果：结果：实验四免疫血清的制备实验四免疫血清的制备【原理】将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称为免疫血清（多克隆抗体）。优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及动物应答的能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物。多克隆抗体多克隆抗体(polyclonal(polyclonalantibody,pcAb)antibody,pcAb)免疫血清的制备流程免疫血清的制备流程一、免疫动物的选择二、免疫程序三、动物采血法四、抗血清的鉴定五、抗血清的纯化、保存抗原来源与动物种属的关系种属差异越远，免疫原性越强动物个体的选择适龄、健康、体重符合要求抗原的性质一、免疫动物的选择一、免疫动物的选择免疫原的剂量免疫间隔时间免疫途径皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结二、免疫程序二、免疫程序颈动脉采血法家兔、绵羊、山羊心脏采血法家兔、豚鼠、大鼠、鸡静脉采血法家兔、山羊、绵羊三、动物采血法三、动物采血法抗体特异性的鉴定双向免疫扩散法抗体效价的鉴定凝集试验、双向免疫扩散试验抗体亲合力的鉴定抗体纯度的鉴定四、抗血清的鉴定四、抗血清的鉴定五、抗血清的纯化、保存五、抗血清的纯化、保存纯化目的是除去这些不相关成分，防止抗血清中其他杂抗体干扰试验结果。2℃～8℃保存：短期保存冰冻保存：保存5年真空干燥保存：保存5～10年例：兔抗羊红细胞抗血清（溶血素）的制备日期（天）第1天第3天第5天第7天第12天第15天途径皮内皮内皮内皮内静脉静脉抗原全血全血全血全血20%悬液20%悬液剂量(ml)0．51．01．52．01．02．0材料：材料：1.1.动物家兔、绵羊。动物家兔、绵羊。2.2.试剂试剂Alsever’sAlsever’s液、生理盐水、佐液、生理盐水、佐剂。剂。3.3.器材注射器、碘酒、酒精、毛细滴器材注射器、碘酒、酒精、毛细滴管。管。常用免疫接种技术常用免疫接种技术1.1.皮内接种皮内接种2.2.皮下接种皮下接种3.3.腹腔接种腹腔接种4.4.耳缘静脉接种耳缘静脉接种5.5.肌肉注射肌肉注射1.1.皮内接种皮内接种将小量药液注入表皮与真皮之间的方法。目的(1)用于各种药物过敏试验，以观察局部反应；(2)预防接种。部位：后背及大腿外侧方操作方法(1)消毒皮肤待干，左手绷紧皮肤，右手持注射器，使针头斜面向上，和皮肤呈5度至15度刺入皮内。(2)待针头斜面进入皮内后，放平注射器，注入药液0.1ml,药量要准确，使局部形成一圆形隆起的皮丘，皮肤变白，毛孔变大。(3)注射完毕，迅速拔出针头，切勿按揉。1.1.皮内接种皮内接种2.2.皮下接种皮下接种将小量药液注入皮下组织的方法。目的(1)需迅速达到药效、不宜经口服给药时采用；(2)预防接种。部位：后背及大腿外侧方操作方法(1)消毒皮肤待干，左手绷紧皮肤，右手持注射器，食指固定针栓，针头斜面向上和皮肤呈30度到40度角，迅速刺入针头的三分之二，放开左手固定针栓，抽吸无回血，即可推注药液。(2)注射完毕，消毒棉签轻按针刺处，快速拔针。2.2.皮下接种皮下接种各种注射的进针深度各种注射的进针深度1.补体参与的溶血反应（操作，2人/组）2.免疫血清的制备与鉴定（操作，6人/组）材料分配材料分配