肇庆学院生命科学学院生物化学课实验报告实验老师李芸瑛12 级 生物科学 3 班 5 组 姓名：张鹏学号： 36 实验日期： 2013 年11 月 27 日实验题目植物中脯氨酸含量的测定实验目的 ：了解植物体内脯氨酸含量对植物抗寒性的影响，掌握标准曲线法测定蛋白质质量浓度的基本操作和722 型分光光度计的试用和操作方法。实验原理 ：采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态( 干或鲜样 ) 限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。样品在 520nm波长下比色，即可从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。实验材料 ：木瓜叶叶片实验器材 ：1. 722 型分光光度计； 2. 研钵；3. 100ml 小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管； 7. 移液管； 8. 胶头滴管； 9. 水浴锅； 10. 漏斗；11. 漏斗架； 12. 滤纸； 13 剪刀。实验试剂 ：1. 酸性茚三酮溶液：将茚三酮溶于30ml 冰醋酸和 20ml6mol/L 磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。2. 3 ％磺基水杨酸： 3g 磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。3. 冰醋酸。4. 甲苯。实验步骤 ：1. 标准曲线的制作（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每 ml 含脯氨酸 100μ g。（2）系列脯氨酸浓度的配制取 6 个 50ml 容量瓶，分别盛入脯氨酸原液，，，，及，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5 及 6μ g/ml 。（3）取 6 支试管，分别吸取2ml 系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和 2ml 酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。（4）冷却后各试管准确加入4ml 甲苯，振荡 30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。（5）用胶头滴管轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（ X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml 测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml ）根据吸光度测定，所得数据如下：编号123456脯 氨 酸 浓 度 （ μg/2ml ）24681012吸光度2. 样品的测定（1）脯氨酸的提取...
