ELISA法在抗体检测中的应用VIP免费

MabVentureCo.Ltd.Confidential1ELISA法在抗体检测中的应用MabVentureCo.Ltd.Confidential21.ELISA介绍酶联免疫吸附测定enzymelinkedimmunosorbentassay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。MabVentureCo.Ltd.Confidential31.1原理这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。③酶与底物反应显色。MabVentureCo.Ltd.Confidential41.2分类：（一）双抗体夹心法（二）间接法（三）竞争法MabVentureCo.Ltd.Confidential51.2.1夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:将具有专一性抗体包被于酶标板上，完成后洗去多余抗体；加入待测样品，样品中若含有待测抗原，则其会与酶标板上的抗体进行专一性结合；洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的抗体，与待测抗原进行结合；洗去多余未结合的抗体，加入带有HRP的二抗，与抗体结合；洗去多余未结合的二抗，加入显色底物显色，并终止，读数。MabVentureCo.Ltd.Confidential61.2.2间接法间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：将已知抗原包被于酶标板上，完成后洗去多余抗原。加入待测样品，样品中若含有待测抗体，则其会与酶标板上的抗原进行专一性结合。洗去多余待测样品，加入带有HRP的二抗，与待测抗体结合。洗去多余未结合二抗，加入显色液显色，测定酶标板中的吸光值（OD值），即可测量待测抗体的含量。MabVentureCo.Ltd.Confidential71.2.3竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：将具有专一性之抗体包被于酶标板上，完成后洗去多余抗体；加入待测样品，使样品中的待测抗原与酶标板上的抗体进行专一性结合；加入带有HRP的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体进行专一性结合，由于酶标板包被的抗体数量有限，因此当样品中抗原的量越多，则带有HRP的抗原可结合的抗体就越少；洗去样品与带有HRP的抗原，加入显色液显色，当样品中抗原量越多，代表酶标板内留下的带有HRP的抗原越少，显色也就越浅。当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。MabVentureCo.Ltd.Confidential82.Case1MV052结合活性方法开发1.Coat:PCSK9-BiotinandmAbantiPCSK92.Analyte:mAbantiPCSK9andPCSK9-Biotin3.Enzyme:GoatantihumanIgG-HRPandSA-HRP4.coloration:TMB1234ABCDEFGHCoatPCSK9-Biotin2000,3×PCSK9-Biotin1000mAbantiPCSK92000，3×mAbantiPCSK91000AnalyteBSATmAbantiPCSK92000，3×PCSK9-Biotin2000,3×BSATEnzymeMabVentureCo.Ltd.Confidential9ResultConclusion：PCSK9andLDLRcombinationisweak.MabVentureCo.Ltd.Confidential10Designofexperiment1.Coat:SA2.Analyte:PCSK9-Biotin3.Detect:mAbantiPCSK94.Enzyme:GoatantihumanIgG-HRP5.coloration:TMB12345ABCDEFGHCoatSA,201052.51AnalytePCSK9-Biotin,1000EnzymeGoatantihumanIgG-HRP,1000MabVentureCo.Ltd.Confidential11ResultConclusion：AftertheSApackageboard,thecombinationofPCSK9andmAbdidnotreceivetheimpact,youcanfurtheroptimizetheconditions.MabVentureCo.Ltd.Confidential12Designofseventhexperiment1.Coat:SA2.Analyte:PCSK9-Biotin3.Detect:mAbantiPCSK93.Enzyme:GoatantihumanIgG-HRP4.coloration:TMB123456789101112DetectAmAbantiPCSK9，100,5×BCDEFGHCoatSA,1000500250125Analyte500250125Enzyme1000MabVentureCo.Ltd.Confidential13ResultConclusion：Afteroptimization,thesensitivityofthismethodisfoundtobeveryhigh,anditcanreachthepglevel.MabVentureCo.Ltd.Confidential14MabVentureCo.Ltd.Confidential15谢谢