实验报告课程名称：生物化学实验 （丙）指导老师：方祥年成绩：__________________ 实验名称：蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的和要求1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin- 酚法①学习 Folin- 酚法测定蛋白质含量的原理和方法；②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量；③掌握分光光度计的使用方法
2、蔗糖酶活力测定——3
5－二硝基水杨酸法①掌握酶活力测定的基本原理和方法；②学习酶的比活力的计算
二、实验内容和原理1、Folin-酚测定法Folin- 酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的
甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物； 乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸 -磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比
可用 500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0
优点：简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定
缺点：该反应受多种因素的干扰
2、蔗糖酶活力测定蔗糖酶（ β -D-呋喃型果糖苷 -果糖水解酶EC 3
26），是一种水解酶
它能催化非还原性双糖（蔗糖）的 1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）
因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成 2mol 还原糖
还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试
