实验五苦味酸法测定血清肌酐肌酐（CRE）是人体内肌酸代谢的最终产物，由肾排出，少部分来自食物，大部分在体内生成，血肌酐的浓度主要取决于GFR。血肌酐的测定对中晚期肾疾病临床意义较大。肌酐测定方法有化学法和酶法。酶法主要有三种类型：肌氨酸氧化酶法、肌酐氨基水解酶法和肌酐亚氨基水解酶法。一、实验目的1.掌握血清肌酐的测定原理和方法。2.了解肌酐测定的参考范围及临床意义。二、实验原理在碱性条件下，血清中的肌酐（Cre）苦味酸反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物。检测505nm波长处吸光度的变化，可知被测血清中的肌酐的浓度。其反应式如下：肌酐+碱性苦味酸红色物质OH-1、主要器具微量移液器三、器材试管与试管架三用水浴箱可见分光光度计四、试剂1.试剂：R1：氢氧化钠R2：苦味酸工作液：将R1与R2按1：1的比例混合面成。2.肌酐标准应用液(133μmol/L)五、操作步骤取试管5支，按下表操作加入物（ml）空白管标准管测定管(U)S1S2U1U2血清——————0.150.15133μmol/L肌酐标准应用液——0.150.15————生理盐水0.15————————R1R20.750.750.750.750.750.750.750.750.750.75混匀后，37度水浴箱放置，2分钟后，波长505nm处，空白管调零，先读取S1、U1吸光度，5分钟后再读取S2、U2吸光度。六、计算参考区间：男性：62-115μmol/L女性：53-97μmol/L血清肌酐（mmol/L）=ΔAU/ΔAS×133μmol/L七、注意事项1.血标本无溶血，应及时处理。2.工作液开盖混合后，应置2-8度避光保存，稳定期3天。八、临床意义肌酐经肾小球滤过后不被肾小管重吸收，通过肾小管排泄。只有当GFR下降到正常的1/3时，Scr才明显上升，是反眏GFR减退的后期指标。增高：见于各种原因引起的肾小球滤过功能减退：各种肾病，急慢性肾衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎等。降低：见于尿崩症、进行性肌萎缩、白血病、贫血等九、方法学评价1.化学法：即苦味酸法，该法成本低廉，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。2.酶法：准确度和灵敏度高，采用两点速率法，适合于自动生化分析仪检测。
