还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法

还原糖和总糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在 540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以 0.9。三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密 pH 试纸。2. 主要仪器(1) 具塞玻璃刻度试管：20mLX11(2) 大离心管:50mLX2(3) 烧杯：lOOmLXl(4) 三角瓶：100mLXl(5) 容量瓶：100mLX3(6) 刻度吸管:lmLXl；2mLX2；10mLXl(7) 恒温水浴锅(8) 沸水浴(9) 离心机(10) 扭力天平(11) 分光光度计3•试剂(1) lmg/mL 葡萄糖标准液准确称取 80°C 烘至恒重的分析纯葡萄糖 lOOmg,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 100mL,混匀，4C 冰箱中保存备用。(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将 6.3gDNS 和 262mL2MNaOH 溶液，加到 500mL 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 lOOOmL，贮于棕色瓶中备用。(3) 碘-碘化钾溶液：称取 5g 碘和 10g 碘化钾，溶于 1OOmL 蒸馏水中。(4) 酚酞指示剂：称取 O.lg 酚酞，溶于 250mL70%乙醇中。(5) 6MHCl 和 6MNaOH 各 100mL。四、操作步骤1.制作葡萄糖标准曲线取 7 支 20mL 具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 lmg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。査号InfigraL；ii.l 自哋柿血股EmT)(Oil>UNS:QLLf(ULEJ0fl2150102-1s1.50.22O.+1.61?0.43O.&1J1.50.64O.K1.2丄亍0831-CH1-0151.061J0s1....