峰形拖尾的原因及解决方法

1 技术报告 改善反相HPLC 中的峰拖尾 在反相HPLC 中峰拖尾是一个普遍的现象。特别是分离碱性化合物和通过HPLC 分析药物成分时是经常产生拖尾缘由。峰拖尾可以引起分离度降低，灵敏度减弱，精密度和定量变差。图 1 表明峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关。图 2 表明准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响。 图 1 拖尾对分离度和灵敏度的影响 当峰拖尾（T，拖尾因子）从 1.0 增加到 2.0 时，分离度（Rs）从 1.5 降到1.0。灵敏度（峰高）由于峰的体积增大和样品的浓度降低而降低。 图 2 峰拖尾对准确度和精密度的不利影响 2 拖尾峰使数据系统难以准确确定峰的终点，故而影响准确度和精密度。在这个例子中，在B 点测得到峰面积比在A 点测得的峰面积少约3%。 峰拖尾的原因，峰拖尾的主要原因有： 1、 溶解样品的溶剂比流动像更强， 2、 样品量过载， 3、 固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应， 4、 硅胶吸附酸性化合物， 5、 色谱柱柱床中有空隙。 只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。（表 1） 表 1 峰拖尾：原因及解决方案 原因 解决方案 样品溶剂极性强于流动相 在流动相中溶解样品，尽可能降低样品溶剂的强度 样品量过载 减少进样量，参考表 2 中推荐的不同柱型对应的不同进样体积 硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。 2.增加流动相的离子强度，25mM～50mM。 3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM 3 的TEA（三乙胺）。 4.选择低硅醇活性的固定相。参照图6 C18 柱按固定相硅醇活性分级。 5. 酸性物质在硅胶上的吸附 1. 增加流动相中盐的浓度，25mM～50mM。 2. 调节流动相的pH<3.0 3. 增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA（三氟乙酸） 柱子空隙 更换新的色谱柱 尝试填充空隙很少能达到较好的效果。 一、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾 如果溶解样品的溶剂极性强于流动相，就会引起宽的甚至是拖尾的峰。有几种线索可以帮助确定是由于此种原因引起的拖尾。第一种就是先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重；另一种迹象就是进样量减少或者是样品经流动相稀释后进样峰拖尾减轻了。 如果怀疑拖尾的原因是流动相的强度引起的，解决很简单。将样品溶解在流动相中，或者将样品经流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求。 二、由样品量过载引起的峰拖尾 当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现一个直角...